專利名稱：：一種丹參酮ⅱa脂質(zhì)復(fù)合物及其注射用膠束組合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明屬于藥物制劑領(lǐng)域，涉及一種丹參酮IIA脂質(zhì)復(fù)合物的制備及其注射用膠束組合物。
背景技術(shù)：
：丹參酮IIA(TanshinoneIIA)，CASNO.:568-72-9，分子式C19H1803分子量294.33，結(jié)構(gòu)式為TheStructureofTanshinonII/TheStructureofSodiumTanshinonllASilate為唇形科植物丹參(SalviamiltiorrhizaBge)的干燥根及根莖的提取物。結(jié)晶粉末為紅色熔點(diǎn)為209'C21(TC，易溶于乙醇，丙酮，乙醚等有機(jī)溶劑，微溶于水。本品能增加冠脈流量，改善缺血區(qū)心肌的側(cè)枝循環(huán)及局部供血，改善缺氧心肌的代謝紊亂，提高心肌耐缺氧能力，抑制血小板聚集及抗血栓形成，縮小實(shí)驗(yàn)動(dòng)物缺血心肌梗死面積，在一定劑量下亦能增強(qiáng)心肌收縮力。適應(yīng)癥可用于冠心病、心絞痛、心肌梗死，也可用于室性早博。本品對(duì)各種類型的心絞痛有療效，擴(kuò)張冠狀動(dòng)脈，增加冠狀動(dòng)脈血流量，減慢心率，增加心肌收縮，抑制凝血，促進(jìn)組織細(xì)胞修復(fù)，降低血脂，保護(hù)紅細(xì)胞生長。適用于冠心病心絞痛和心肌梗賽、腦動(dòng)脈和視網(wǎng)膜及外周靜脈血栓抑制劑，可以治療白塞氏綜合癥，結(jié)節(jié)性紅斑。本品的衍生物丹參酮IIA磺酸鈉可用于肌注、靜注或靜滴每日1次4080mg。推注用25%葡萄溏液20m1稀釋。靜滴用5%葡萄糖液250500m1稀釋。丹參酮IIA的親水/親脂指數(shù)為74/401=0.197，要將其直接制成水溶液十分困難，因此限制其臨床使用。丹參酮IIA磺酸鈉雖然增加了丹參酮IIA的水溶性，但使丹參酮IIA的脂溶性減弱，致使其不易進(jìn)入組織，尤其不易透過血腦屏障進(jìn)入腦組織，使其作用范圍變窄。由于其在血液中的半衰期短，因此靜滴時(shí)需用較大劑量。磺酸鈉鹽為離子型化合物，較難透過以脂質(zhì)及蛋白為基礎(chǔ)的生物膜結(jié)構(gòu)系統(tǒng)。對(duì)結(jié)核桿菌的抑菌活性實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，丹參酮nA的MIC為0.31ug/ml，而丹參酮IIA磺酸鈉的MIC為5ug/ml(《中國藥科大學(xué)學(xué)報(bào)》1998,4:258)。同時(shí)因?yàn)樾枰獙?duì)丹參酮IIA進(jìn)行磺化反應(yīng)，增加了不必要的步驟。
發(fā)明內(nèi)容膽固醇是一種中性脂質(zhì)，亦屬于雙親分子，其結(jié)構(gòu)與膽酸相似，但親油性強(qiáng)于親水性，經(jīng)衍生化后的膽固醇酰硫酸鈉親水性增強(qiáng)。與膽鹽相比親脂性比親水性強(qiáng)得多，因此對(duì)親脂性藥物的包容性更強(qiáng)。由于其與硫酸是以酯鍵形式結(jié)合，因此，進(jìn)入體內(nèi)后可以快速水解成膽固醇，而成為體的固有成分之一，毒性極小。膽固醇酰硫酸鈉可以通過親脂性部分的疏水力以及可能也通過親水性部分的極性親和力與丹參酮IIA形成按照一定分子摩爾數(shù)比的多分子復(fù)合物。這種復(fù)合物也可以和磷脂的親水頭部和兩個(gè)疏水的尾部產(chǎn)生交連作用，增加復(fù)合物的物理化學(xué)穩(wěn)定性。這種脂質(zhì)復(fù)合物在水或以緩沖液為水化介的溶劑中可自發(fā)形成膠束。將丹參酮IIA、磷脂和膽固醇硫酸鈉溶解在有機(jī)相中，再將此有機(jī)相注入到緩沖液中時(shí)，有機(jī)相便開始在緩沖液中擴(kuò)散，有機(jī)相濃度降低，藥物、磷脂和膽固醇硫酸鈉在有機(jī)相中的溶解度下降，不能溶解的藥物和磷脂、膽固醇硫酸鈉相互結(jié)合形成一種分子復(fù)4物以膠體的形式分散在緩沖液中，隨有機(jī)相濃度的繼續(xù)降低，剩下的丹參酮IIA和磷脂、膽固醇硫酸鈉同樣結(jié)合在一起以膠體形式分散在緩沖液中，如此反復(fù)，至全部的藥物和磷脂、膽固醇硫酸鈉形成復(fù)合物而分散。所制藥物脂質(zhì)復(fù)合物屬于一種膠體分散體系，由于其粒徑在lOOrnn以下，所以丹參酮IIA脂質(zhì)復(fù)合物的滅菌采用過濾過0.22Mm濾膜滅菌法。從而解決了脂質(zhì)體、乳劑等微粒制劑因無法滅菌或滅菌后粒徑增大、藥物降解等問題，為工業(yè)化生產(chǎn)鋪平了道路本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是采用藥劑手段，將丹參酮IIA制成適合注射給藥的劑型，既能保留丹參酮IU可順利通過細(xì)胞膜的特性。又能分散在水性介質(zhì)中，形成膠束，便于臨床肌注射或靜滴給藥。加入長循環(huán)輔料還可避免體內(nèi)網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)吞噬，延長藥物有效時(shí)間。本發(fā)明的又一個(gè)目的是提供一種制備本發(fā)明的丹參酮IIA脂質(zhì)復(fù)合物及其注射用膠束組合物的方法。為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供了一種丹參酮IIA脂質(zhì)復(fù)合物及其注射用膠束組合物，由治療有效量的丹參酮IIA、磷脂、膽固醇硫酸鹽或類似膽固醇衍生物、附加劑、長循環(huán)輔料和注射用水組成。120wt%0.000120wt%0.000120wt%015wt%015wt%余量。在上述技術(shù)方案中，本發(fā)明提供的丹參酮IIA脂質(zhì)復(fù)合物及其注射用膠束組合物含有以下成分丹參酮IIA磷脂膽固醇硫酸鹽或類似膽固醇衍生物長循環(huán)輔料附加劑注射用水磷脂包括天然來源的磷脂與合成來源的磷脂，所述天然來源的磷脂為從植物或動(dòng)物中通過物理加工方法提取出來的磷脂，如大豆卵磷脂、蛋黃卵磷脂、腦磷脂、磷脂酰肌醇、神經(jīng)鞘磷脂、絲氨酸磷脂等；所述合成來源的磷脂為通過半合成或合成方法制得的磷脂，如氫化磷脂、多烯磷脂酰膽堿、DMPC、DPPC、DMPG、DPPG、DPPE、DSPE、DPPA、DSPA及其結(jié)構(gòu)修飾物如PEG化衍生物DSPE-PEG2000等。優(yōu)選的是，該磷脂為大豆卵磷脂。膽固醇硫酸鹽或/和類似膽固醇衍生物包括膽固醇硫酸鈉、膽固醇硫酸鉀、膽固醇磷酸鈉、膽固醇磷酸鉀、膽固醇磺酸鈉、膽固醇磺酸鉀和其它方式修飾的上述膽固醇衍生物及其任意組合。優(yōu)選的是該膽固醇硫酸鹽為膽固醇硫酸鈉。長循環(huán)輔料為PEG分子量為PEG分子量為100010000的硬脂酸酯、PEG分子量為100010000維生素E琥珀酸酯、PEG硬脂酸酯與分子量為20010000的PEG的混合物、Myrj類、Brij類、PEG—二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺、PEG—二棕櫚酰磷脂酰膽堿、PEG—二棕櫚酰磷脂酰乙醇胺、神經(jīng)節(jié)苷脂、聚丙烯酰胺、殼聚糖、聚乙二醇聚十六烷基腈基丙酸酯、分子量為20010000的PEG、PVP或PVA及其任意組合。優(yōu)選的是神經(jīng)節(jié)苷脂、PEG—二硬脂?；字Ｒ掖及?、PEG—二棕櫚酰磷脂酰膽堿及其任意組合。本發(fā)明提供的丹參酮IIA脂質(zhì)復(fù)合物進(jìn)一步包括015w"/。的附加劑，優(yōu)選包括05wtX的附加劑。所述附加劑可起到增加制劑穩(wěn)定性、調(diào)節(jié)滲透壓、抗氧化等作用，選自滲透壓調(diào)節(jié)劑，如丙三醇、丙二醇、甘露醇等；界面膜穩(wěn)定劑，如油酸、油酸鈉等；金屬離子絡(luò)合劑，如EDTA、乙二按四乙酸二鈉鹽、鈣鹽等；防腐劑，如苯扎溴胺、苯扎氯胺、對(duì)羥基苯甲酸酯類、山梨酸等；抗氧劑，如維生素C、維生素E等；分子量為20010000的PEG、PVP或PVA及其任意組合。優(yōu)選的是，該附加劑為丙三醇、甘露醇、油酸鈉、EDTA、維生素C、維生素E、PEG及其任意組合。本發(fā)明還提供了一種本發(fā)明的丹參酮IIA脂質(zhì)復(fù)合物及其注射用膠束組合物的制備方法，該方法包括以下步驟(1)將處方量的丹參酮IIA、磷脂、膽固醇硫酸鹽或類似膽固醇衍生物或、長循環(huán)輔料、附加劑分散于有機(jī)溶劑中，以構(gòu)成有機(jī)相；(2)將長循環(huán)輔料、附加劑溶于注射用水中，以構(gòu)成水相；(3)在060'C的溫度下，在攪拌或/和高剪切條件下將所述有機(jī)相和水相混合，再采用減壓蒸發(fā)等方法除去有機(jī)溶劑，從而制得丹參酮IIA脂質(zhì)復(fù)合物。(4)將所得丹參酮IIA脂質(zhì)復(fù)合物用0.22iim的濾膜濾過除菌，分裝，置于4t!下密封保存，即得注射液，其粒徑在20-200nm之間。(5)將上述所得膠束加入凍干保護(hù)劑進(jìn)行凍干處理，即得粉針劑，加溶媒再分散后，其粒徑在20-200mn之間。其中，對(duì)所得到的丹參酮IIA脂質(zhì)復(fù)合物進(jìn)行凍干處理的工藝可為將140wt9&(重量比)的凍干保護(hù)劑溶于本發(fā)明的丹參酮IIA脂質(zhì)復(fù)合物的水分散體中，該凍干保護(hù)劑選自海藻糖、甘露醇、蔗糖、葡萄糖、氯化鈉、乳糖、山梨醇、右旋糖苷、甘油或甘氨酸及其任意組合，然后分裝于西林瓶中，并置于冷凍干燥機(jī)中-45-C預(yù)凍3h，然后以5°C/h升溫至-50°C，維持10h，再以5°C/h升溫至0°C，維持8h，最后升溫至10'C保溫10小時(shí)后出箱，加塞密封即可。具體實(shí)施例方式實(shí)施例1取丹參酮IIA500mg，蛋黃卵磷脂2.0g,膽固醇硫酸鈉德g，維生素E10mg，溶解于3(TC的甲醇中作為有機(jī)相；將PEG4000.5g溶于90ml注射用水中，加熱至3(TC作為水相，在3(TC攪拌下將有機(jī)相注入水相，持續(xù)攪拌5min，再減壓旋轉(zhuǎn)蒸去甲醇，得帶藍(lán)色乳光的丹參酮IIA脂質(zhì)復(fù)合物，測(cè)其平均粒徑為82士17nm。加注射用水補(bǔ)至總體積為100ml，用0.22um的微孔濾膜濾過除菌，分裝2ml/支，12rC滅菌30min，即得注射液。在制得的脂質(zhì)復(fù)合物加入海藻糖5g,注射用水至100ml，用0.22um的微孔濾膜濾過除菌，分裝2ml/支，無菌操作下冷凍干燥，即得。將凍干后的制劑用生理鹽水稀釋，測(cè)其平均粒徑為93士20nm。實(shí)施例2取丹參酮IIA1.0g，大豆卵磷脂3.0g，膽固醇硫酸鈉500mg，溶解于35'C的無水乙醇中作為有機(jī)相；將PEG200l.Og溶于90ml注射用水中，加熱至35。C作為水相，在35。C攪拌下將有機(jī)相注入水相，持續(xù)攪拌10min，再減壓旋轉(zhuǎn)蒸去乙醇，得帶藍(lán)色乳光的丹參酮IIA脂質(zhì)復(fù)合物，測(cè)其平均粒徑為72土12nm。加注射用水補(bǔ)至總體積為100ml，用0.22um的微孔濾膜濾過除菌，分裝2ml/支，12rC滅菌30min，即得注射液。在制得的脂質(zhì)復(fù)合物加入海藻糖5g，注射用水至100ml，用0.22um的微孔濾膜濾過除菌，分裝4ml/支，無菌操作下冷凍干燥，即得。將凍干后的制劑用生理鹽水稀釋，測(cè)其平均粒徑為82土17nm。實(shí)施例3取丹參酮IIA2.0mg，大豆卵磷脂10g，膽固醇磺酸鈉5g，溶解于35。C的四氫呋喃中作為有機(jī)相；將poloxamer1885g溶于950ml注射用水中，加熱至35"C作為水相，在35'C攪拌下將有機(jī)相注入水相，持續(xù)攪拌lOmin，再減壓旋轉(zhuǎn)蒸去四氫呋喃，得帶藍(lán)色乳光的丹參酮IIA脂質(zhì)復(fù)合物，測(cè)其平均粒徑為65土23nm加注射用水補(bǔ)至總體積為100ml，用0.22um的微孔濾膜濾過除菌，分裝2ml/支，12rC滅菌30min，即得注射液。在制得的脂質(zhì)復(fù)合物加入海藻糖5g，注射用水至100ml，用0.22um的微孔濾膜濾過除菌，分裝4ml/支，無菌操作下冷凍干燥，即得。將凍干后的制劑用生理鹽水稀釋，測(cè)其平均粒徑為70士18nm。實(shí)施例4表1列舉了幾種丹參酮IIA脂質(zhì)復(fù)合物及其注射用膠束組合物的處方及凍干針劑和注射劑的規(guī)格，但所用處方組成、各輔料配比及制劑規(guī)格不限于下表所列濃度。制備方法與工藝同實(shí)施例1-3。表1丹參酮IIA脂質(zhì)復(fù)合物處方<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>實(shí)施例5(1)刺激性試驗(yàn)取健康家兔6只分別固定于兔箱內(nèi)，隨機(jī)分成2組，每組3只家兔，左右耳緣靜脈分別滴注生理鹽水和丹參酮IIA注射液、丹參酮IIA脂質(zhì)復(fù)合物注射液。即左耳給生理鹽水，右耳給丹參酮IIA注射液或丹參酮nA脂質(zhì)復(fù)合物注射液(用0.9%的氯化鈉注射液稀釋)。丹參酮IIA注射液和丹參酮IIA脂質(zhì)復(fù)合物注射液給藥劑量相同，均為10mg/只，溶液總體積均為12ml/只/次。左耳耳緣靜脈滴注生理鹽水，滴注量及滴注速度同檢品組。每日各滴注1次，連續(xù)3天，觀察兔耳緣靜脈刺激反應(yīng)。于末次給藥24h后將兔子放血處死，取下兩耳進(jìn)行組織切片檢查(切片位置距進(jìn)針位置2.6cm),根據(jù)病變程度，記為"-"，"+"，"++"，"+++","++++"。切片病理學(xué)檢査結(jié)果表明1)左耳陰性對(duì)照(氯化鈉注射液)的各取材點(diǎn)耳緣靜脈管壁完整，血管無明顯擴(kuò)張。內(nèi)皮細(xì)胞清晰、無腫脹、壞死，管壁及管周無明顯炎癥細(xì)胞浸潤，管壁內(nèi)未見血栓形成等病變。2)右耳陽性對(duì)照(丹參酮IIA注射液)組的各取材點(diǎn)血管明顯擴(kuò)張為"++"，內(nèi)皮細(xì)胞腫脹、壞死為"++"，見血栓形成為"++"，管壁及管周見出血及炎癥細(xì)胞浸潤為"+++"。3)右耳丹參酮IIA脂質(zhì)復(fù)合物注射液組的各取材點(diǎn)耳緣靜脈管壁完整，血管無明顯擴(kuò)張。管腔內(nèi)未見血栓形成等病變。丹參酮IU脂質(zhì)復(fù)合物組形態(tài)學(xué)明顯好于市售丹參酮IIA注射液組，無明顯刺激性。試驗(yàn)結(jié)果表明，丹參酮IIA脂質(zhì)復(fù)合物注射液對(duì)家兔耳靜脈血管未見明顯刺激作用。(2)溶血性試驗(yàn)取家兔血10mL，置于涂有肝素的離心試管中，4000rPm離心5min,棄去上層血漿，將血細(xì)胞用生理鹽水10mL沖洗多次，每次沖洗后離心除去上清液，直至上清液不呈紅色為止，然后吸取一定量紅細(xì)胞，按體積比稀釋制備2%的紅細(xì)胞混懸液，4r冰箱中冷藏備用。記錄方式"一一"凝集不溶血，但出現(xiàn)紅細(xì)胞凝聚成團(tuán)，搖晃后能重新分開。"一"不溶血紅細(xì)胞全部下沉，上層為淡黃色略微混濁的溶液。"+"部分溶血溶液呈淡黃色或淺紅色，試管底部有少量紅細(xì)胞殘留。"++"溶血溶液呈紅色，試管底部無紅細(xì)胞殘留。表2溶血性試驗(yàn)結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage16</column></row><table>結(jié)果顯示，所制的丹參酮IIA脂質(zhì)復(fù)合物溶液未引起紅細(xì)胞的溶血反應(yīng)，符合靜脈注射的標(biāo)準(zhǔn)。權(quán)利要求1、一種丹參酮IIA脂質(zhì)復(fù)合物，由治療有效量的丹參酮IIA、磷脂、膽固醇硫酸鹽或/和類似膽固醇衍生物組成。2、一種由權(quán)利要求1所述的丹參酮IIA脂質(zhì)復(fù)合物組成的注射用膠束組合物，其含有以下成分丹參酮IIA0.00000120wt%磷脂0.000120wt%膽固醇硫酸鹽或/和類似膽固醇衍生物0.000120wt%附加劑015wt%注射用水余量。3、根據(jù)權(quán)利要求1所述丹參酮IIA脂質(zhì)復(fù)合物，其特征在于丹參酮IU脂質(zhì)復(fù)合物顆粒懸浮于水性介質(zhì)中粒徑在20-200mn之間。4、根據(jù)權(quán)利要求12任一項(xiàng)所述的丹參酮IIA脂質(zhì)復(fù)合物，其特征在于其中所述磷脂選自所有天然來源和合成來源的磷脂及其任意組合。5、根據(jù)權(quán)利要求4所述的丹參酮IIA脂質(zhì)復(fù)合物，其特征在于所述天然來源的磷脂為從植物或動(dòng)物中通過各種加工方法提取出來的磷脂，如大豆磷脂、蛋黃磷脂、腦磷脂、磷脂酰肌醇、神經(jīng)鞘磷脂、絲氨酸磷脂；所述合成來源的磷脂為通過半合成或合成方法制得的磷脂，如氫化磷脂、多烯磷脂酰膽堿、DMPC、DPPC、DMPG、DPPG、DPPE、DSPE、DPPA、DSPA及其結(jié)構(gòu)修飾物如PEG化衍生物DSPE-PEG2000。6、根據(jù)權(quán)利要求12任一項(xiàng)所述的丹參酮IIA脂質(zhì)復(fù)合物，其特征在于其中所述膽固醇硫酸鹽或/和類似膽固醇衍生物包括膽固醇硫酸鈉、膽固醇硫酸鉀、膽固醇磷酸鈉、膽固醇磷酸鉀、膽固醇磺酸鈉、膽固醇磺酸鉀和其它方式修飾的上述膽固醇衍生物及其任意組合；所述附加劑選自滲透壓調(diào)節(jié)劑、界面膜穩(wěn)定劑、金屬離子絡(luò)合劑、防腐劑、抗氧劑、分子量為20010000的PEG、PVP或PVA及其任意組合。7、一種制備權(quán)利要求16所述的丹參酮IIA脂質(zhì)復(fù)合物的方法，其特征在于，該方法包括以下步驟-(1)將處方量的丹參酮IIA、磷脂、膽固醇硫酸鹽或類似膽固醇衍生物或、長循環(huán)輔料、附加劑分散于有機(jī)溶劑中，以構(gòu)成有機(jī)相；(2)將長循環(huán)輔料、附加劑溶于注射用水中，以構(gòu)成水相；(3)在060"C的溫度下，在攪拌或/和高剪切條件下將所述有機(jī)相和水相混合，再采用減壓蒸發(fā)等方法除去有機(jī)溶劑，從而制得丹參酮IIA脂質(zhì)復(fù)合物。(4)將所得丹參酮IIA脂質(zhì)復(fù)合物用0.22um的濾膜濾過除菌，分裝即注射液，粒徑為20-200nm。8、根據(jù)權(quán)利要求7所述的制備丹參酮IIA脂質(zhì)復(fù)合物的方法，其特征在于所述有機(jī)溶劑選自二氯甲烷、氯仿、丙酮、甲醇、乙醇、乙醚、四氫呋喃或異丙醇及其任意組合。9、根據(jù)權(quán)利要求7所述制備丹參酮IU脂質(zhì)復(fù)合物的方法，其特征在于向所述制得的丹參酮IIA脂質(zhì)復(fù)合物進(jìn)一步加入凍干保護(hù)劑以制成凍干制劑，臨用前加無菌注射用水或生理鹽水重建后靜脈注射或肌注給藥，粒徑為20-200nm。10、根據(jù)權(quán)利要求7或9所述的制備丹參酮IIA脂質(zhì)復(fù)合物的方法，其特征在于所述凍干保護(hù)劑選自海藻糖、甘露醇、蔗糖、葡萄糖、氯化鈉、乳糖、山梨醇、右旋糖苷、甘氨酸及其任意組合。全文摘要本發(fā)明提供了一種丹參酮IIA脂質(zhì)復(fù)合物及其注射膠束用組合物。該丹參酮IIA脂質(zhì)復(fù)合物由治療量的丹參酮IIA、磷脂、膽固醇硫酸鹽或/和類似膽固醇衍生物、附加劑與注射用水組成。通過將丹參酮IIA脂質(zhì)化，從而解決了丹參酮IIA水中不溶，無法直接將其制成注射劑的問題。本發(fā)明提供的丹參酮IIA脂質(zhì)復(fù)合物注射劑具有副作用小，血管刺激性低，載藥量高，粒徑分布窄、可濾過除菌，藥物穩(wěn)定性好等優(yōu)點(diǎn)。文檔編號(hào)A61K9/00GK101439034SQ200710158459公開日2009年5月27日申請(qǐng)日期2007年11月22日優(yōu)先權(quán)日2007年11月22日發(fā)明者張曉君,颯徐,德瑞克·王申請(qǐng)人:沈陽沃森藥物研究所