專(zhuān)利名稱：：含納豆菌及納豆激酶的凍干粉的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及一種含納豆菌及納豆激酶的凍干粉的制備方法。技術(shù)背景據(jù)資料顯示，日本人的消化道疾病、血栓和血栓性血管阻塞疾病發(fā)病幾率很低，這和他們每天食用納豆有著很大的聯(lián)系。納豆是大豆經(jīng)過(guò)浸泡、去水、蒸煮等過(guò)程后，接入納豆菌發(fā)酵而成的。經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)，納豆具有多種保健作用，這主要和以下3個(gè)方面有關(guān)系-1.納豆菌具有廣譜抗菌作用，對(duì)革蘭氏陽(yáng)性菌、革蘭氏陰性菌、酵母菌和霉菌都有一定的拮抗作用，對(duì)異常漢遜酵母具有強(qiáng)抗菌作用。納豆菌可以產(chǎn)生的抗菌素如桿菌肽、多黏菌素、2，6-吡啶二羧酸，具有抑制金黃色葡萄球菌、沙門(mén)氏菌、傷寒菌、痢疾菌及大腸桿菌等致病菌的作用；2.大豆經(jīng)納豆菌發(fā)酵后，產(chǎn)生VK、染料木素、粗抗氧化劑提取物等物質(zhì)，對(duì)降脂、抗癌、防治骨質(zhì)疏松等有較大的作用；3.納豆菌發(fā)酵后產(chǎn)生的納豆激酶可以有效地溶解血栓，另外還具有降低血液粘度，抑制血小板凝固，降血脂、降膽固醇，改善血液循環(huán)狀況，維持血細(xì)胞的正常形態(tài)和功能等多種生理功能。由于傳統(tǒng)技術(shù)生產(chǎn)的納豆，常溫狀態(tài)下保質(zhì)期很短，且納豆激酶的活性不能長(zhǎng)久的保持，大大限制了其作為保健食品的開(kāi)發(fā)價(jià)值。又由于納豆有拉絲，特殊的氣味等特征，在中國(guó)沒(méi)有市場(chǎng)。另外，現(xiàn)在開(kāi)發(fā)的納豆及納豆激酶產(chǎn)品，或只有納豆激酶成分，工藝復(fù)雜，成本昂貴，或直接用納豆粉碎干燥后制成，但對(duì)起抗菌作用的納豆菌的開(kāi)發(fā)卻比較忽略。據(jù)以上分析可以看出，開(kāi)發(fā)納豆及納豆激酶制品的關(guān)鍵是尋找工藝簡(jiǎn)單、產(chǎn)率高、兼具大豆發(fā)酵產(chǎn)物、納豆激酶及納豆菌保健功能的新產(chǎn)品。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的主要目的是為了克服上述不足，提供一種含納豆菌及納豆激酶的凍干粉的制備方法。該制備方法可盡量保持發(fā)酵后納豆激酶的活性，并同時(shí)保留發(fā)酵液中納豆菌活菌及營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，使其保健作用能得到最大限度的開(kāi)發(fā)；并且能較長(zhǎng)時(shí)間保持其功效成分，可制成膠囊，便于服用。為達(dá)到上述目的，本發(fā)明的技術(shù)解決方案如下一種含納豆菌及納豆激酶的凍干粉的制備方法，其特征在于其過(guò)程包括ai咅養(yǎng)基配制及滅菌，其中，培養(yǎng)基其質(zhì)量百分比成分為黃豆粉8%15%，蔗糖l%5%，NaC10.4%0.6%，余量為水，pH值為6.87.2;b.納豆菌接種，納豆菌接種量為2%~8%;c.發(fā)酵，接種后于3638'C溫度下培養(yǎng)發(fā)酵2028h;d.發(fā)酵液真空冷凍干燥取發(fā)酵液，加1%7%發(fā)酵液質(zhì)量的甘油做保護(hù)劑，在-18'C以下溫度預(yù)凍后，真空冷凍干燥1220h，再3(TC以下解析干燥，即得凍干粉。黃豆通過(guò)粉碎得到黃豆粉，黃豆粉過(guò)200目篩，優(yōu)選為等于或小于200目的黃豆粉，便于接種。本發(fā)明的含納豆菌及納豆激酶的凍干粉的制備方法，其所述培養(yǎng)基其質(zhì)量百分比成分優(yōu)選為黃豆粉10%,蔗糖2%，NaC10.5%，余量為水，pH值為7.0;所述納豆菌接種量?jī)?yōu)選為5%;發(fā)酵過(guò)程中納豆菌接種后優(yōu)選為于37'C溫度下培養(yǎng)發(fā)酵24h。本發(fā)明與以往納豆激酶凍干粉制作的不同在于用黃豆粉、蔗糖、NaCl等常見(jiàn)物質(zhì)作培養(yǎng)基進(jìn)行納豆菌的發(fā)酵，成本低廉，利于工業(yè)生產(chǎn)，冷凍干燥過(guò)程在保持納豆激酶活性前提下，兼顧了納豆菌及發(fā)酵液中其它營(yíng)養(yǎng)成分的保留，并簡(jiǎn)化了工藝步驟，降低了納豆激酶純化成本。凍干粉可制成膠囊，不僅使有效物質(zhì)保持較長(zhǎng)時(shí)間的活性，而且可以掩蓋特殊氣味，便于消費(fèi)者接受。具體實(shí)施方式下面通過(guò)實(shí)施例對(duì)本發(fā)明方案做詳細(xì)描述。1.培養(yǎng)基配制及滅菌步驟實(shí)施例配制培養(yǎng)基，其中，培養(yǎng)基其質(zhì)量百分比成分為黃豆粉8%15%，蔗糖1%5%，NaC10.5%,余量為水，pH值為7.0。各具體含量見(jiàn)表1所示(表中只列出了黃豆粉及蔗糖的含量)，黃豆通過(guò)粉碎得到黃豆粉，黃豆粉過(guò)200目篩。對(duì)培養(yǎng)基滅菌，按接種量5%接入納豆菌，在37XT下發(fā)酵24h。取發(fā)酵液，加5%發(fā)酵液質(zhì)量的甘油做保護(hù)劑，在-19'C預(yù)凍后，真空冷凍干燥16h，再25'C解析干燥，即得凍干粉。(以上百分比均為質(zhì)量百分比。)納豆激酶用纖維蛋白平板法測(cè)定，納豆菌數(shù)用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)，結(jié)果見(jiàn)表l。選擇普通牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基，其質(zhì)量百分比成分為蛋白胨1%，牛肉膏0.3%，NaC10.5%，瓊脂2%，余量為水，pH值為6.8-7.2，其余操作制備步驟同實(shí)施例1，發(fā)酵冷凍后測(cè)試其納豆菌數(shù)和納豆激酶活性，結(jié)果也列于表l。表1.納豆激酶活性及納豆菌數(shù)的比較<table>tableseeoriginaldocumentpage5</column></row><table>通過(guò)實(shí)驗(yàn)結(jié)果可以看出，在培養(yǎng)基成分為黃豆粉8%15%，蔗糖1%~5%，NaCl0.5%,余量為水，pH值為7.0條件下，納豆激酶活性及納豆菌數(shù)無(wú)明顯的變化，都高于對(duì)比例所得到的納豆激酶活性單位，但最佳條件是黃豆粉10%，蔗糖2%。2.納豆菌接種步驟實(shí)施例配制成分為黃豆粉(黃豆粉碎過(guò)200目篩)10%,蔗糖2%，NaC10.5%，pH6.8-7.2的培養(yǎng)基，以2%、5%、8%的接種量接入納豆菌，在37'C下發(fā)酵24h。取發(fā)酵液，加5%發(fā)酵液重量的甘油做保護(hù)劑，在-18'C以下溫度預(yù)凍后，真空冷凍干燥16h，再3(TC以下解析干燥，即得凍干粉。納豆激酶用纖維蛋白平板法測(cè)定，納豆菌數(shù)用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)，結(jié)果見(jiàn)表2。表2.納豆激酶活性及納豆菌數(shù)的比較<table>tableseeoriginaldocumentpage5</column></row><table>由結(jié)果可以看出，接種量在2-8%的范圍內(nèi)對(duì)納豆激酶活性及納豆菌數(shù)無(wú)多大影響，相對(duì)來(lái)說(shuō)，5%的接種量為優(yōu)選。3.發(fā)酵液真空冷凍干燥步驟實(shí)施例比較制備過(guò)程中加和不加甘油制備凍干粉的納豆激酶活性和納豆菌存活率配制成分為黃豆粉(黃豆粉碎過(guò)200目篩)10%，蔗糖2%,NaCl0.5%，pH6.8-7.2的培養(yǎng)基，以5%的接種量接入納豆菌，在37'C下發(fā)酵24h。取發(fā)酵液，一部分5%發(fā)酵液重量的甘油做保護(hù)劑，另一部分不加甘油做保護(hù)劑，在-18'C以下溫度預(yù)凍后，真空冷凍干燥16h,再30'C以下解析干燥，即得凍干粉。納豆激酶用纖維蛋白平板法測(cè)定，納豆菌數(shù)用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)，結(jié)果見(jiàn)表3。表3.甘油(保護(hù)劑)的添加對(duì)納豆激酶活性及納豆菌生存率的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)為了解含納豆菌納豆激酶凍干粉在常溫常壓下能否保持酶活及納豆菌活菌數(shù)，對(duì)本發(fā)明含納豆菌及納豆激酶的凍干粉的制備方法制得的凍干粉進(jìn)行了穩(wěn)定性測(cè)定，結(jié)果見(jiàn)表4:表4.含納豆菌納豆激酶凍干粉穩(wěn)定性測(cè)定<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>通過(guò)實(shí)驗(yàn)結(jié)果可以看出，12個(gè)月后納豆激酶的酶活下降了2.56%，納豆菌活菌數(shù)下降了14.5%，因此，凍干粉在常溫常壓下是可以保持較長(zhǎng)時(shí)間的。以上實(shí)施例是對(duì)專(zhuān)利的說(shuō)明和進(jìn)一步解釋?zhuān)皇菍?duì)本發(fā)明的限制，在本發(fā)明的精神和權(quán)利保護(hù)范圍，所做的任何修改，都落入本發(fā)明的保護(hù)范圍。權(quán)利要求1、一種含納豆菌及納豆激酶的凍干粉的制備方法，其特征在于其過(guò)程包括a.配制及培養(yǎng)基滅菌，其中，培養(yǎng)基其質(zhì)量百分比成分為黃豆粉8％～15％，蔗糖1％～5％，NaCl0.4％～0.6％，余量為水，pH值為6.8～7.2；b.納豆菌接種，納豆菌接種量為2％～8％；c.發(fā)酵，接種后于36～38℃溫度下培養(yǎng)發(fā)酵20～28h；d.發(fā)酵液真空冷凍干燥取發(fā)酵液，加1％～7％發(fā)酵液質(zhì)量的甘油做保護(hù)劑，在-18℃以下溫度預(yù)凍后，真空冷凍干燥12～20h，再30℃以下解析干燥，即得凍干粉。2、根據(jù)權(quán)利要求1所述的含納豆菌及納豆激酶的凍干粉的制備方法，其特征在于所述黃豆粉粒徑等于或小于200目。3、根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的含納豆菌及納豆激酶的凍干粉的制備方法，其特征在于所述培養(yǎng)基其質(zhì)量百分比成分為黃豆粉10X，蔗糖2X,NaC10.5X，余量為水，pH值為7.0。4、根據(jù)權(quán)利要求3所述的含納豆菌及納豆激酶的凍干粉的制備方法，其特征在于所述納豆菌接種量為5%。5、根據(jù)權(quán)利要求4所述的含納豆菌及納豆激酶的凍干粉的制備方法，其特征在于發(fā)酵過(guò)程中納豆菌接種后于37'C溫度下培養(yǎng)發(fā)酵24h。全文摘要本發(fā)明涉及一種含納豆菌及納豆激酶的凍干粉的制備方法，其過(guò)程包括a.配制及培養(yǎng)基滅菌，其中，培養(yǎng)基質(zhì)量百分比成分為黃豆粉8％～15％，蔗糖1％～5％，NaCl0.4％～0.6％，余量為水，pH值為6.8～7.2；b.納豆菌接種，接種量為2％～8％；c.發(fā)酵，接種后于36～38℃溫度下培養(yǎng)發(fā)酵20～28h；d.發(fā)酵液真空冷凍干燥取發(fā)酵液，加1％～7％發(fā)酵液重量的甘油做保護(hù)劑，在-18℃以下溫度預(yù)凍后，真空冷凍干燥12～20h，再30℃以下解析干燥，即得。該法成本低廉，利于工業(yè)生產(chǎn)，冷凍干燥過(guò)程在保持納豆激酶活性前提下，兼顧了納豆菌及發(fā)酵液中其它營(yíng)養(yǎng)成分的保留，降低了納豆激酶純化成本。文檔編號(hào)A61K35/66GK101214263SQ20071016463公開(kāi)日2008年7月9日申請(qǐng)日期2007年12月26日優(yōu)先權(quán)日2007年12月26日發(fā)明者吳天星,張麗靖,郁楊申請(qǐng)人:浙江大學(xué)寧波理工學(xué)院