專利名稱：一種水溶性富勒烯及其應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及化工領(lǐng)域，特別是一種水溶性富勒烯及其應(yīng)用。
背景技術(shù)：
作為碳元素的第三種同素異形體富勒烯家庭的發(fā)現(xiàn)，是上世紀(jì)自然科學(xué)發(fā)展史最重要的突破之一。Kroto等三人也因?yàn)樗麄冊(cè)诟焕障┭芯恐虚_(kāi)創(chuàng)性的工作而榮獲1996年諾貝爾化學(xué)獎(jiǎng)。富勒烯以其獨(dú)特的結(jié)構(gòu)和性質(zhì)倍受人們重視，近十年來(lái)，幾乎全世界所有著名大學(xué)和研究所的科學(xué)家都進(jìn)行了與富勒烯有關(guān)的研究。它已成為當(dāng)今物理、化學(xué)、材料及生命科學(xué)研究者共同關(guān)心的課題。富勒烯分子的重要科學(xué)意義，被美國(guó)《Science》雜志評(píng)為1991年的“明星分子”。在納米材料中，包括富勒烯、碳納米管在內(nèi)的碳納米材料一直是近年來(lái)國(guó)際科學(xué)的前沿領(lǐng)域之一。富勒烯是由60個(gè)碳原子組成的球形分子，包含12個(gè)五元環(huán)和20個(gè)六元環(huán)，直徑為O. 71nm。近年來(lái)，富勒烯在生物醫(yī)藥領(lǐng)域的研究相當(dāng)引人矚目，·研究發(fā)現(xiàn)富勒烯具有多種特殊的生物學(xué)效應(yīng)(I)可抑制多種酶的活性，包括HIV蛋白酶以及逆轉(zhuǎn)錄酶；(2)對(duì)腫瘤細(xì)胞顯示出細(xì)胞毒性；(3)具有神經(jīng)保護(hù)劑的作用；(4)還具有在可見(jiàn)光照射下產(chǎn)生氧自由基、切割DNA的作用。富勒烯作為一種優(yōu)良的光敏劑表現(xiàn)在其在可見(jiàn)光照射的情況下可以產(chǎn)生活性氧，活性氧包括單線態(tài)氧、超氧負(fù)離子等。富勒烯光照下產(chǎn)生活性氧為高度反應(yīng)性的，并且可以表現(xiàn)出明顯的細(xì)胞毒性，比如裂解細(xì)胞中的DNA，抑制細(xì)胞的有絲分裂以及生長(zhǎng)，還可以抑制細(xì)胞蛋白水解酶的活性。由此推斷，富勒烯可以用于腫瘤的治療。為此利用富勒烯作為光敏劑開(kāi)展光動(dòng)力療法，即使其在腫瘤組織中蓄積，利用光照產(chǎn)生活性氧來(lái)選擇性的破壞腫瘤組織。透明質(zhì)酸(HA)，又名玻尿酸，是一種酸性粘多糖，它是一種水溶性高分子聚合物，具有良好的生物可吸收性、生物兼容性、黏稠性及保水性。在細(xì)胞膜的表面有4類透明質(zhì)酸的特定受體一⑶44(⑶分化群)、RHAMM(HA中介的游動(dòng)性受體)、IVd4及LEC(肝內(nèi)皮細(xì)胞受體)，其中CD44在腫瘤細(xì)胞中的含量較高，而且不同的腫瘤細(xì)胞所含有的CD44的結(jié)構(gòu)也不同。受體介導(dǎo)的腫瘤靶向性透明質(zhì)酸納米藥物載體的研究。有報(bào)道證明，CD44可以抑制細(xì)胞的凋亡，其與單克隆抗體類(mAbs)或HA結(jié)合,不僅能抑NT淋巴細(xì)胞的凋亡,還能提高B淋巴細(xì)胞的存活率。它具有很好的靶向作用，無(wú)毒，并且能夠抑制癌細(xì)胞擴(kuò)張。目前將富勒烯表面接枝一種具有靶向腫瘤細(xì)胞作用的高分子水溶性聚合物透明質(zhì)酸，得到一種新的水溶性富勒烯，及其作為光敏劑和藥物轉(zhuǎn)運(yùn)載體在腫瘤治療中的應(yīng)用尚未見(jiàn)報(bào)道，因此，本發(fā)明的研制成功具有統(tǒng)計(jì)學(xué)上的意義和實(shí)際的臨床意義。

發(fā)明內(nèi)容
針對(duì)上述情況，為解決現(xiàn)有技術(shù)之缺陷，本發(fā)明之目的就是提供一種水溶性富勒烯及其應(yīng)用，可有效解決現(xiàn)有腫瘤治療藥物副作用大、不能很好的抑制腫瘤細(xì)胞增殖的問(wèn)題。
其解決的技術(shù)方案是一種富勒烯-透明質(zhì)酸聚合物，即水溶性富勒烯，它是在原始的富勒烯經(jīng)過(guò)純化處理的基礎(chǔ)上，與氨化試劑反應(yīng)，將富勒烯表面連接上反應(yīng)活性較強(qiáng)的氨基后，再與透明質(zhì)酸反應(yīng)，生成富勒烯-透明質(zhì)酸聚合物，其中，透明質(zhì)酸和富勒烯的質(zhì)量含量比為O. 18-0. 25:1。水溶性富勒烯的制備方法，包括以下步驟
1)將氨化試劑20ml和氫氧化鈉Ig混合，再加入水和無(wú)水乙醇的重量比為I:5的混合溶劑60ml，攪拌均勻后，逐滴加入含有富勒烯的有機(jī)溶液50ml，在30-50°C、200r/min下攪拌反應(yīng)1-7天，除去上層的有機(jī)溶劑，蒸除水和無(wú)水乙醇的混合溶劑，再用無(wú)水乙醇或甲醇500ml抽濾洗滌15次，在20-60°C下，真空干燥24_72h，得氨基富勒烯；所述的氨化試劑為乙二胺、1，3-丙二胺、1，6-己二胺中的一種；所述的含有富勒烯的有機(jī)溶液由富勒烯和有機(jī)溶劑組成，每Iml的有機(jī)溶液中含富勒烯Img ;所述的有機(jī)溶劑為甲苯、苯、四氫呋喃中的一種或兩種以上的混合物；
2)稱取上述得到的氨基富勒烯50mg與透明質(zhì)酸80mg、l-乙基_(3-二甲基氨基丙基) 碳酰二亞胺鹽酸鹽(EDC · HCl) 160mg、N-羥基琥珀酰亞胺(NHS) 120mg在20ml甲酰胺或N，N- 二甲基甲酰胺中混合均勻，在40-60 V、200r/min下攪拌反應(yīng)24h，再用無(wú)水乙醇或丙酮500ml抽濾洗滌20次，除去未反應(yīng)的I-乙基-(3- 二甲基氨基丙基)碳酰二亞胺鹽酸鹽、N-羥基琥珀酰亞胺和透明質(zhì)酸，在20-60°C下，真空干燥24-72h，得富勒烯-透明質(zhì)酸聚合物，即水溶性富勒烯。富勒烯-透明質(zhì)酸聚合物作為光敏劑在腫瘤治療中的應(yīng)用分為體外和體內(nèi)兩部分
1)將制得的富勒烯-透明質(zhì)酸聚合物溶于水中制成溶液，加入到癌細(xì)胞A中進(jìn)行培養(yǎng)，給藥后3h后用光源B光照，光照30-120min，繼續(xù)培養(yǎng)24小時(shí)，測(cè)定癌細(xì)胞A的存活率；
2)將制得的富勒烯-透明質(zhì)酸聚合物溶于水中制成溶液，靜脈注射到荷瘤小鼠C體內(nèi)，給藥后3h后用光源D光照，光照時(shí)間為30-120min，測(cè)量荷瘤小鼠C的腫瘤體積大小。上述步驟I中的癌細(xì)胞A為器官表面或者內(nèi)部出現(xiàn)的各種實(shí)體瘤，肺癌，鼻咽癌，食道癌，胃癌，肝癌，大腸癌，乳腺癌，卵巢癌，膀胱癌，白血病，胰腺癌，宮頸癌，喉癌，甲狀腺癌，舌癌，腦瘤(顱內(nèi)腫瘤)，小腸腫瘤，膽囊癌，膽管癌，腎癌，前列腺癌，陰莖癌，睪丸腫瘤，子宮內(nèi)膜癌，絨毛膜癌，陰道惡性腫瘤，外陰惡性腫瘤，霍奇金病，非霍奇金淋巴瘤，皮膚癌，惡性黑色素瘤中的一種。上述步驟I中的光源B為400-800nm波長(zhǎng)的寬波長(zhǎng)光源或者激光中的一種。優(yōu)選532nm激光。上述步驟2中的荷瘤小鼠C為器官表面或者內(nèi)部出現(xiàn)的各種實(shí)體瘤，肺癌，鼻咽癌，食道癌，胃癌，肝癌，大腸癌，乳腺癌，卵巢癌，膀胱癌，白血病，胰腺癌，宮頸癌，喉癌，甲狀腺癌，舌癌，腦瘤(顱內(nèi)腫瘤)，小腸腫瘤，膽囊癌，膽管癌，腎癌，前列腺癌，陰莖癌，睪丸腫瘤，子宮內(nèi)膜癌，絨毛膜癌，陰道惡性腫瘤，外陰惡性腫瘤，霍奇金病，非霍奇金淋巴瘤，皮膚癌，惡性黑色素瘤中的一種。上述步驟2中的光源D為400-800nm波長(zhǎng)的寬波長(zhǎng)光源或者激光中的一種。優(yōu)選532nm激光。本發(fā)明的富勒烯-透明質(zhì)酸聚合物作為光敏劑來(lái)進(jìn)行光動(dòng)力治療體內(nèi)深度腫瘤時(shí)，這些光源不能夠穿透照射時(shí)，可以通過(guò)適用與所述部位的方法來(lái)改善外部光源照射的穿透力進(jìn)行腫瘤的治療。本發(fā)明的富勒烯-透明質(zhì)酸聚合物作為光敏劑可以制成任意的藥物制劑劑型，比如注射劑、注射用無(wú)菌粉針、分散劑、貼劑、凝膠劑、植入劑等。本發(fā)明的富勒烯-透明質(zhì)酸聚合物可以加入各種制劑的添加劑，比如生理鹽水、葡萄糖、緩沖溶液和防腐劑等以便于制備成需要的劑型。給藥方式可以為靜脈注射、肌肉注射、瘤內(nèi)注射和皮下注射、透皮給藥、體內(nèi)植入方式等。富勒烯-透明質(zhì)酸聚合物作為藥物轉(zhuǎn)運(yùn)載體在腫瘤治療中的應(yīng)用，分為以下幾個(gè)步驟
1)將制得的富勒烯-透明質(zhì)酸聚合物和抗腫瘤藥物A通過(guò)方式B進(jìn)行結(jié)合；
2)將裝載藥物的富勒烯-透明質(zhì)酸聚合物進(jìn)行抗腫瘤細(xì)胞C和體內(nèi)的抗腫瘤D的評(píng) 價(jià)。上述步驟I中的抗腫瘤藥物A為難溶性抗腫瘤藥物、水溶性藥物和核酸藥物，比如多西紫杉醇、紫杉醇、阿霉素、順鉬、卡鉬、柔紅霉素、寡義反核苷酸、小干擾RNA和酶類藥物中的一種或幾種。上述步驟I中的方式B為超聲、攪拌、探超和旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)中的一種或幾種。上述步驟2中的腫瘤細(xì)胞C為器官表面或者內(nèi)部出現(xiàn)的各種實(shí)體瘤，肺癌，鼻咽癌，食道癌，胃癌，肝癌，大腸癌，乳腺癌，卵巢癌，膀胱癌，白血病，胰腺癌，宮頸癌，喉癌，甲狀腺癌，舌癌，腦瘤(顱內(nèi)腫瘤)，小腸腫瘤，膽囊癌，膽管癌，腎癌，前列腺癌，陰莖癌，睪丸腫瘤，子宮內(nèi)膜癌，絨毛膜癌，陰道惡性腫瘤，外陰惡性腫瘤，霍奇金病，非霍奇金淋巴瘤，皮膚癌，惡性黑色素瘤中的一種。上述步驟2中的腫瘤D為器官表面或者內(nèi)部出現(xiàn)的各種實(shí)體瘤，肺癌，鼻咽癌，食道癌，胃癌，肝癌，大腸癌，乳腺癌，卵巢癌，膀胱癌，白血病，胰腺癌，宮頸癌，喉癌，甲狀腺癌，舌癌，腦瘤(顱內(nèi)腫瘤)，小腸腫瘤，膽囊癌，膽管癌，腎癌，前列腺癌，陰莖癌，睪丸腫瘤，子宮內(nèi)膜癌，絨毛膜癌，陰道惡性腫瘤，外陰惡性腫瘤，霍奇金病，非霍奇金淋巴瘤，皮膚癌，惡性黑色素瘤中的一種。本發(fā)明的富勒烯-透明質(zhì)酸聚合物作為藥物轉(zhuǎn)運(yùn)載體可以更多的分布在腫瘤組織中，與正常組織相比，它可以長(zhǎng)期的高濃度的保留在腫瘤組織中，這樣當(dāng)采用適當(dāng)?shù)氖侄问褂霉庠催M(jìn)行照射時(shí)能夠在腫瘤組織中產(chǎn)生更多的活性氧，并且可以使其裝載的藥物在腫瘤部位濃度提高。但也會(huì)分布在正常的組織器官中，為了避免產(chǎn)生的活性氧對(duì)正常組織產(chǎn)生損傷，可以通過(guò)一些手段來(lái)加以改善，比如可以在富勒烯-透明質(zhì)酸聚合物上裝載一些具有靶向性質(zhì)的靶頭，也可以使用抗體等手段介導(dǎo)，可以使用臨床手段比如說(shuō)內(nèi)窺鏡的方式來(lái)直接輸送載藥系統(tǒng)到達(dá)靶組織，聚焦光照面積等方式。本發(fā)明的富勒烯-透明質(zhì)酸聚合物作為藥物轉(zhuǎn)運(yùn)載體可以制成任意的藥物制劑劑型，比如注射劑、注射用無(wú)菌粉針、分散劑、貼劑、凝膠劑、植入劑等。本發(fā)明的富勒烯-透明質(zhì)酸聚合物可以加入各種制劑的添加劑，比如生理鹽水、葡萄糖、緩沖溶液和防腐劑等以便于制備成需要的劑型。給藥方式可以為靜脈注射、肌肉注射、瘤內(nèi)注射和皮下
注射等。本發(fā)明物理以及化學(xué)穩(wěn)定性良好，制備條件容易滿足，原料來(lái)源豐富，成本低，副作用小，是腫瘤治療藥物載體上的創(chuàng)新。
具體實(shí)施例方式以下結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明的具體實(shí)施方式
作進(jìn)一步詳細(xì)說(shuō)明。實(shí)施例I
1)將乙二胺20ml和氫氧化鈉Ig加入水和無(wú)水乙醇重量比為1:5的混合溶液60ml,攪拌均勻后，逐滴加入lmg/ml的富勒烯的甲苯溶液50ml,在30°C、200r/min下攪拌反應(yīng)7天，除去上層的甲苯，蒸除水和無(wú)水乙醇的混合溶液，再用無(wú)水乙醇500ml抽濾洗滌15次，在40°C下，真空干燥48h，得氨基富勒烯；
2)稱取上述氨基富勒烯50mg與透明質(zhì)酸80mg、I-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亞胺鹽酸鹽160mg、N-輕基琥拍酰亞胺120mg在20ml甲酰胺中混合均勻，在40°C、200r/ min下攪拌反應(yīng)24h,再用無(wú)水乙醇500ml抽濾洗漆20次,除去未反應(yīng)的I-乙基_(3_ 二甲基氨基丙基)碳酰二亞胺鹽酸鹽、N-羥基琥珀酰亞胺和透明質(zhì)酸，在40°C下，真空干燥48h，得水溶性富勒烯35mg。實(shí)施例2
1)將1，3_丙二胺20ml和氫氧化鈉Ig加入水和無(wú)水乙醇重量比為1:5的混合溶液60ml,攪拌均勻后,逐滴加入lmg/ml的富勒烯的苯溶液50ml,在30°C、200r/min下攪拌反應(yīng)7天，除去上層的苯，蒸除水和無(wú)水乙醇的混合溶液，再用甲醇500ml抽濾洗滌15次，在20°C下，真空干燥72h，得氨基富勒烯；
2)稱取上述氨基富勒烯50mg與透明質(zhì)酸80mg、l-乙基_(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亞胺鹽酸鹽160mg、N-羥基琥珀酰亞胺120mg在20mlN，N-二甲基甲酰胺中混合均勻，在40°C、200r/min下攪拌反應(yīng)24h，再用丙酮500ml抽濾洗滌20次，除去未反應(yīng)的I-乙基-(3- 二甲基氨基丙基)碳酰二亞胺鹽酸鹽、N-羥基琥珀酰亞胺和透明質(zhì)酸，在40°C下，真空干燥48h，得水溶性富勒烯32mg。實(shí)施例3
I)將1,6-己二胺20ml和氫氧化鈉Ig加入水和無(wú)水乙醇重量比為1:5的混合溶液60ml中，攪拌均勻后，逐滴加入lmg/ml的富勒烯的四氫呋喃溶液50ml，在30°C、200r/min下攪拌反應(yīng)7天，除去上層的四氫呋喃，蒸除水和無(wú)水乙醇的混合溶液，再用甲醇500ml抽濾洗滌15次，在60°C下，真空干燥24h，得氨基富勒烯；
2)稱取上述氨基富勒烯50mg與透明質(zhì)酸80mg、l-乙基_(3- 二甲基氨基丙基)碳酰二亞胺鹽酸鹽160mg、N-輕基琥拍酰亞胺120mg在20mlN, N- 二甲基甲酰胺中混合均勻，在40°C、200r/min下攪拌反應(yīng)24h，再用丙酮500ml抽濾洗滌20次，除去未反應(yīng)的I-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亞胺鹽酸鹽、N-羥基琥珀酰亞胺和透明質(zhì)酸，在40°C下，真空干燥48h,得水溶性富勒烯30mg。相關(guān)試驗(yàn)資料如下
一、使用光照射本發(fā)明水溶性富勒烯對(duì)腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)的抑制活性的測(cè)定通過(guò)光照射水溶性富勒烯在體外抗腫瘤活性將PC3前列腺癌細(xì)胞(由上海細(xì)胞庫(kù)提供)用作待考察的癌細(xì)胞。將PC3細(xì)胞培養(yǎng)在含胎牛血清(FBS) 10%，青鏈霉素混合液1%的RPMI1640培養(yǎng)基中，培養(yǎng)箱條件為37°C、5% CO2,每2 3天傳代一次。收集對(duì)數(shù)期細(xì)胞，調(diào)整細(xì)胞懸液濃度，96孔板每孔加入200 μ 1，鋪板使待測(cè)細(xì)胞調(diào)密度至6 X IO3個(gè)/孔，(邊緣孔用無(wú)菌PBS填充)。置于5% CO2, 37 °C孵育24 h，至細(xì)胞單層鋪滿孔底(96孔平底板)，加入濃度梯度(12. 5、25、50、100μ g/ml)的水溶性富勒烯透明質(zhì)酸，設(shè)置復(fù)孔為4 6個(gè)。光照組放置在400W可見(jiàn)光中60min，保持光照過(guò)程中溫度在37°C，光照結(jié)束后用鋁箔包裹細(xì)胞板置于CO2培養(yǎng)箱中孵育24 h，對(duì)于不光照組而言，則直接用鋁箔包裹細(xì)胞板置于CO2培養(yǎng)箱中孵育24 h，終止培養(yǎng)，吸出含藥培養(yǎng)基，每孔用150 μ I PBS洗2遍，加入預(yù)冷的10% TCA 200 μ 1,4 °C放置I h。倒掉固定液，每孔用去離子水洗5遍，甩干，空氣干燥。每孔加入100 μ I的SRB溶液，靜置放置10 min，未與蛋白結(jié)合的SRB用1%醋酸洗5遍，空氣干燥。結(jié)合的SRB用150 μ I 10 mmol/L非緩沖Tris堿溶解。在515 nm處測(cè)定每孔的OD值。存活率的計(jì)算公式存活率=實(shí)驗(yàn)組OD值/對(duì)照組OD值，其中實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組均為扣除空白對(duì)照組后的值。結(jié)果表明，當(dāng)用光照射60min,水溶性富勒烯透明質(zhì)酸的加入直接影響了 PC3細(xì)胞的增殖。二、光照射時(shí)，水溶性富勒烯的體內(nèi)抗腫瘤活性測(cè)定
取小鼠S180腹水瘤細(xì)胞，用注射用生理鹽水以3:1比例稀釋后，每只小鼠于腹腔注射0.3 ml,小鼠喂養(yǎng)7天后，抽取小鼠S180腹水瘤細(xì)胞，計(jì)數(shù)后以注射用生理鹽水稀釋成濃度為2 X IO6個(gè)/ml的細(xì)胞懸液,皮下接種與小鼠右前肢上部。小鼠接種腫瘤7天后,取其中24只腫瘤體積彡100 mm3昆明小鼠，隨機(jī)分為4組，每組6只。具體分組如下(I)對(duì)照組(NS組)生理鹽水；(2)生理鹽水激光組；(3)水溶性富勒烯透明質(zhì)酸組；(4)水溶性富勒烯透明質(zhì)酸激光組。4組均采用靜脈給藥的方式，其中光照組使用的光源為532nm綠相光源，功率為300mW，給藥3h后激光照射腫瘤部位，一次照射時(shí)間為lOmin。每2天給藥一次，每次注射生理鹽水或者2mg/ml的水溶性富勒烯透明質(zhì)酸100 μ 1，共給藥7次。整個(gè)實(shí)驗(yàn)過(guò)程中每日觀察小鼠生活狀態(tài)，每2 d稱其體重并使用游標(biāo)卡尺測(cè)量小鼠肉瘤的長(zhǎng)徑(A)與短
徑(B)，按公式腫瘤體積
權(quán)利要求
1.一種水溶性富勒烯，其特征在于，該水溶性富勒烯是在富勒烯分子上通過(guò)化學(xué)鍵連接透明質(zhì)酸制成，透明質(zhì)酸和富勒烯的質(zhì)量比為O. 18-0. 25:1，所述的富勒烯為C6tl富勒烯。
2.權(quán)利要求I所述的水溶性的富勒烯的制備方法，其特征在于，包括以下步驟 1)將氨化試劑20ml和氫氧化鈉Ig混合，再加入水和無(wú)水乙醇的重量比為1:5的混合溶劑60ml，攪拌均勻后，逐滴加入含有富勒烯的有機(jī)溶液50ml，在30-50°C、200r/min下攪拌反應(yīng)1-7天，除去上層的有機(jī)溶劑，蒸除水和無(wú)水乙醇的混合溶劑，再用無(wú)水乙醇或甲醇500ml抽濾洗滌15次，在20-60°C下，真空干燥24_72h，得氨基富勒烯；所述的氨化試劑為乙二胺、1，3-丙二胺、1，6-己二胺中的一種；所述的含有富勒烯的有機(jī)溶液由富勒烯和有機(jī)溶劑組成，每Iml的有機(jī)溶液中含富勒烯Img ;所述的有機(jī)溶劑為甲苯、苯、四氫呋喃中的一種或兩種以上的混合物； 2)稱取上述得到的氨基富勒烯50mg與透明質(zhì)酸80mg、l-乙基_(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亞胺鹽酸鹽160mg、N-羥基琥珀酰亞胺120mg在20ml甲酰胺或N，N-二甲基甲酰胺中混合均勻，在40-60°C、200r/min下攪拌反應(yīng)24h,再用無(wú)水乙醇或丙酮500ml抽濾洗漆20次，除去未反應(yīng)的I-乙基-(3- 二甲基氨基丙基)碳酰二亞胺鹽酸鹽、N-羥基琥珀酰亞胺和透明質(zhì)酸，在20-60°C下，真空干燥24-72h，得富勒烯-透明質(zhì)酸聚合物，即水溶性富勒烯。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的水溶性富勒烯的制備方法，其特征在于，I)將乙二胺20ml和氫氧化鈉Ig加入水和無(wú)水乙醇重量比為1:5的混合溶液60ml，攪拌均勻后，逐滴加入Img/ml的富勒烯的甲苯溶液50ml,在30°C、200r/min下攪拌反應(yīng)7天,除去上層的甲苯,蒸除水和無(wú)水乙醇的混合溶液，再用無(wú)水乙醇500ml抽濾洗滌15次，在40°C下，真空干燥48h，得氨基富勒烯； 2)稱取上述氨基富勒烯50mg與透明質(zhì)酸80mg、I-乙基-(3- 二甲基氨基丙基)碳酰二亞胺鹽酸鹽160mg、N-輕基琥拍酰亞胺120mg在20ml甲酰胺中混合均勻，在40°C、200r/min下攪拌反應(yīng)24h,再用無(wú)水乙醇500ml抽濾洗漆20次,除去未反應(yīng)的I-乙基_(3_ 二甲基氨基丙基)碳酰二亞胺鹽酸鹽、N-羥基琥珀酰亞胺和透明質(zhì)酸，在40°C下，真空干燥48h，得水溶性富勒烯35mg。
4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的水溶性富勒烯的制備方法，其特征在于，I)將1，3-丙二胺20ml和氫氧化鈉Ig加入水和無(wú)水乙醇重量比為1:5的混合溶液60ml，攪拌均勻后，逐滴加入lmg/ml的富勒烯的苯溶液50ml,在30°C、200r/min下攪拌反應(yīng)7天,除去上層的苯,蒸除水和無(wú)水乙醇的混合溶液，再用甲醇500ml抽濾洗滌15次，在20°C下，真空干燥72h，得氨基富勒烯； 2)稱取上述氨基富勒烯50mg與透明質(zhì)酸80mg、l-乙基_(3- 二甲基氨基丙基)碳酰二亞胺鹽酸鹽160mg、N-羥基琥珀酰亞胺120mg在20mlN，N-二甲基甲酰胺中混合均勻，在40°C、200r/min下攪拌反應(yīng)24h，再用丙酮500ml抽濾洗滌20次，除去未反應(yīng)的I-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亞胺鹽酸鹽、N-羥基琥珀酰亞胺和透明質(zhì)酸，在40°C下，真空干燥48h，得水溶性富勒烯32mg。
5.根據(jù)權(quán)利要求2所述的水溶性富勒烯的制備方法，其特征在于，I)將1，6-己二胺20ml和氫氧化鈉Ig加入水和無(wú)水乙醇重量比為1:5的混合溶液60ml中，攪拌均勻后，逐滴加入lmg/ml的富勒烯的四氫呋喃溶液50ml,在30°C、200r/min下攪拌反應(yīng)7天,除去上層的四氫呋喃，蒸除水和無(wú)水乙醇的混合溶液，再用甲醇500ml抽濾洗滌15次，在60°C下，真空干燥24h，得氨基富勒烯； 2)稱取上述氨基富勒烯50mg與透明質(zhì)酸80mg、l-乙基_(3- 二甲基氨基丙基)碳酰二亞胺鹽酸鹽160mg、N-羥基琥珀酰亞胺120mg在20mlN，N-二甲基甲酰胺中混合均勻，在40°C、200r/min下攪拌反應(yīng)24h，再用丙酮500ml抽濾洗滌20次，除去未反應(yīng)的I-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亞胺鹽酸鹽、N-羥基琥珀酰亞胺和透明質(zhì)酸，在40°C下，真空干燥48h,得水溶性富勒烯30mg。
6.根據(jù)權(quán)利要求I或2-5任何一項(xiàng)所述的水溶性富勒烯，其特征在于，所述的水溶液富勒烯的粒徑為30-300nm。
7.根據(jù)權(quán)利要求I或2-5任何一項(xiàng)所述的水溶性富勒烯在抗腫瘤光動(dòng)力治療的光敏劑中的應(yīng)用。
8.權(quán)利要求I或2-5任何一項(xiàng)所述的水溶性富勒烯在作為抗腫瘤藥物載體中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明涉及水溶性富勒烯及其應(yīng)用，可有效解決現(xiàn)有腫瘤治療藥物副作用大、不能很好的抑制腫瘤細(xì)胞增殖的問(wèn)題，其解決的技術(shù)方案是，在原始的富勒烯經(jīng)過(guò)純化處理的基礎(chǔ)上，與氨化試劑反應(yīng)，將富勒烯表面連接上反應(yīng)活性較強(qiáng)的氨基后，再與透明質(zhì)酸反應(yīng)，生成富勒烯-透明質(zhì)酸聚合物，其中，透明質(zhì)酸和富勒烯的質(zhì)量含量比為0.18-0.25:1，本發(fā)明物理以及化學(xué)穩(wěn)定性良好，制備的條件容易滿足，原料來(lái)源豐富，成本低，副作用小，是腫瘤治療藥物載體上的創(chuàng)新。
文檔編號(hào)A61P35/00GK102898542SQ20121040670
公開(kāi)日2013年1月30日 申請(qǐng)日期2012年10月23日 優(yōu)先權(quán)日2012年10月23日
發(fā)明者張紅嶺, 史進(jìn)進(jìn), 張振中, 劉艷, 葉凡, 高君, 劉瑞瑗, 馬柔柔, 余曉媛, 張靜, 王蕾, 侯琳 申請(qǐng)人:鄭州大學(xué)