專利名稱：自體移植術(shù)的方法、工具和用具盒的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及的領(lǐng)域為軟骨細(xì)胞的移植術(shù)、骨和軟骨的移植及愈合、關(guān)節(jié)修復(fù)和關(guān)節(jié)炎疾病的預(yù)防，具體地說為移植位點的準(zhǔn)備方法、該準(zhǔn)備工作所用的工具以及向已準(zhǔn)備好的移植位點進(jìn)行自體移植所用的工具。
背景技術(shù)：
在美國，每年要作超過50萬例關(guān)節(jié)成形手術(shù)和整個關(guān)節(jié)的替換。在歐洲，類似手術(shù)的數(shù)量與此相近。這個數(shù)目中包括歐洲每年約有9萬例整個膝部替換和5萬例左右的膝部缺損修復(fù)手術(shù)。在美國，各種手術(shù)數(shù)量亦基本相同(載于Praemer A.，F(xiàn)umer S.，Rice D.P.，美國肌骨胳動態(tài)Musculoskeletal Conditions in the United States)，美國整形外科研究院，ParkRidge III，1992，125)。一種軟骨再生療法可能是非常有用的，這種方法可以在關(guān)節(jié)損傷的早期實施，從而減少必須作人造關(guān)節(jié)替換外科手術(shù)患者的數(shù)目。這種預(yù)防性療法也會減少發(fā)展成為骨關(guān)節(jié)炎的患者數(shù)目。
關(guān)節(jié)內(nèi)軟骨構(gòu)造的表面修整技術(shù)曾經(jīng)主要是試圖采用軟骨下鉆、磨和其它方法來作軟骨修復(fù)，結(jié)果是切除了病變軟骨和軟骨下的骨質(zhì)，使血管已經(jīng)形成的網(wǎng)狀骨質(zhì)裸露(Insall，臨床整形雜志(J.，Clin.Orthop.)1974，101，61；Ficat R.P.等，臨床整形雜志(Clin.Orthop.)1979，144，74；Johnson L.L.，手術(shù)整形(Operative Arthroscopy)，McGinty J.B.編，Raven Press，New York，1991，341)。
Coon和Cahn在科學(xué)(Science)1966，153，1116上描述了一種由小雞胚胎體節(jié)合成的軟骨細(xì)胞的培養(yǎng)技術(shù)。Later Cahn和Lasher(PNAS USA 1967，58，1131)利用此系統(tǒng)來分析作為軟骨分化的前提的DNA合成所涉及到的事物。軟骨細(xì)胞通過生長來應(yīng)答EFG和FGF二者(Gospldarowicz和Mescher細(xì)胞生理雜志(J.，Cell Physiology)1977，93，117)，但最終失去其分化功能(Benya等，細(xì)胞(Cell)1978，15，1313)。種植軟骨細(xì)胞的方法是由Brittberg，M.等人描述并經(jīng)較小修正后主要由他們進(jìn)行應(yīng)用的(新英格蘭醫(yī)學(xué)雜志(New Engl.J.Med.)1994，331，889)。這種方法種植的細(xì)胞被用于患者膝關(guān)節(jié)中的自體移植。另外，Kolettas等人借助于延長細(xì)胞培養(yǎng)研究了諸如膠原和含蛋白多糖等軟骨特性分子的表達(dá)(細(xì)胞科學(xué)雜志(J.Cell Science)1995，108，1991)。他們發(fā)現(xiàn)，盡管在單層培養(yǎng)物中進(jìn)行培養(yǎng)時存在形態(tài)學(xué)變化(Aulthouse，A.等，體內(nèi)細(xì)胞發(fā)育生物學(xué)(In vitro Cell Dev.Biol.)1989，25，659；Archer，C.等，細(xì)胞科學(xué)雜志(J.Ceu Sci.)1990，97，361；Hanselmann，H.等，細(xì)胞科學(xué)雜志(J.Cell Sci.)1994，107，17；Bonaventure，J.等，實驗細(xì)胞研究(Exp.Cell Res，)1994，212，97)，但當(dāng)與瓊脂糖凝膠、海藻膠質(zhì)珠粒上生長的懸浮體培養(yǎng)物或與由不同的科學(xué)家所試驗過的旋轉(zhuǎn)培養(yǎng)物(保持圓的細(xì)胞形態(tài))相比，諸如II型和IX型膠原的軟骨細(xì)胞表達(dá)標(biāo)記沒有變化，大的聚集態(tài)含蛋白多糖、aggrecan、versican以及鍵合蛋白質(zhì)沒有變化(Kolettas，E.等，細(xì)胞科學(xué)雜志(J.Cell Science)1995，108，1991)。
關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞是只存在于軟骨中的特殊的間質(zhì)衍生細(xì)胞。軟骨是一種無血管供應(yīng)的組織，它的物理性質(zhì)取決于軟骨細(xì)胞產(chǎn)生的胞外間質(zhì)。軟骨內(nèi)的骨化軟骨細(xì)胞的老化導(dǎo)致細(xì)胞肥大，其特征為X型膠原表達(dá)的出現(xiàn)(Upholt，W.B和Olsen，R.R.，載于Cartilage Molecular Aspects(hall，B&Newman，S.編)，CRC Boca Raton 1993，43；Reichenberger，E.等，Dev.Biol.1991，148，562；Kirsch，T.等，Differentiation，1992，52，89；Stephens，M.等，J.Cell Sci.1993，103，1111)。
關(guān)節(jié)軟骨的表面或外層中的II型膠原亦可由于骨關(guān)節(jié)炎而使其過度退化。膠原網(wǎng)狀組織因而削弱并隨之發(fā)生原纖維化，這樣含蛋白多糖一類的基質(zhì)材類丟失并最終完全被排出。被骨關(guān)節(jié)炎削弱的軟骨的纖維化可以發(fā)展到軟骨鈣化并擴(kuò)展到軟骨下骨質(zhì)內(nèi)(Kempsos，G.E.等，Biochim.Biophys，Acta 1976，428，741；Roth，V.和Mow，V.C，，J.Bone Joint Surgery，1980，62A，1102；Woo，S.L.-Y等，Handbook of Bioengineering(R.Skalak和S.Chien編)，McGraw-Hill，New York，1987，P.4.1～4.44)。
有關(guān)基礎(chǔ)研究、骨的組織解剖學(xué)和微觀解剖學(xué)、軟骨和其它類似的結(jié)締組織的描述可從例如Wheater，Burkitt和Daniels的Functional Histology第二版(Churchill Livingston，London，1987，chp.4)中找到。有關(guān)骨、軟骨和其它類似的結(jié)締組織中的缺損的組織解剖學(xué)基礎(chǔ)的論述可從例如Wheater，Burkitt，Stevens和Lowe的Basic Histipathology(Churchill Livingston，London，1985，Chp.21)中找到。
盡管在軟骨細(xì)胞培育、骨和軟骨的處理方面取得進(jìn)展，用于修理受損的鉸接表面的軟骨或軟骨細(xì)胞移植工作卻并末取得很大的成功。本發(fā)明所具有的技術(shù)提供了實在而有效的手段，有助于在關(guān)節(jié)的接縫和其它為軟骨所覆蓋的骨表面損傷處進(jìn)行軟骨和/或軟骨移植，從而使軟骨再生以修整缺損。本發(fā)明還提供了用于移植位點準(zhǔn)備工作的外科手術(shù)工具，從而更容易使移植材料與移植位點有效地成為一體。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明提供一種通過一個止血屏障和無細(xì)胞的覆蓋補(bǔ)片將適宜基質(zhì)中的軟骨移植到待治療表面上來有效地治療關(guān)節(jié)連接表面軟骨的方法，該方法包括首先在緊貼待治療表面的位置上放置一止血屏障，再在該待治療表面上方止血屏障的頂部上置放處于適宜基質(zhì)中的軟骨細(xì)胞，然后在該待治療表面上覆蓋一無細(xì)胞的覆蓋補(bǔ)片。止血屏障如同后面將進(jìn)一步說明那樣是一道抑制或阻止正經(jīng)形成血管的細(xì)胞和組織滲透到移植材料內(nèi)的屏障。具體地說，本方法所提供的止血屏障是一種可吸收的半滲透材料，該材料抑制或阻止血管滲過屏障。在一個實施方案中，該止血屏障包含了膠原。這里所用的無細(xì)胞一詞與本領(lǐng)域中的一樣，是指一種材料基本上沒有完整的，具有進(jìn)一步細(xì)胞分裂、傳播能力或具有生物活性的細(xì)胞。在一個優(yōu)選實施方案中，無細(xì)胞材料中是沒有任何完整的有核細(xì)胞的。在一個實施方案中，本方法使用了一種包含半滲透膠原基質(zhì)的無細(xì)胞覆蓋補(bǔ)片。在本方法的一個優(yōu)選實施方案中，無細(xì)胞覆蓋補(bǔ)片的多孔的一面朝向移植材料。
本發(fā)明還提供了將膠原或軟骨細(xì)胞移植到移植位點的自體移植術(shù)，其中首先是用外科操作進(jìn)行移植位點的準(zhǔn)備工作，以使其更好地接受移植材料。在一個實施方案中，移植位點經(jīng)過雕刻，因而移植位點的壁面整修成波紋狀，因此當(dāng)置放在移植位點內(nèi)的移植材料膨脹而與移植位點壁面相接觸時，該壁面將阻擋整個移植物相對于移植位點遷移或被擠出。本發(fā)明還提供設(shè)計成可按照本發(fā)明的方法所教導(dǎo)對移植位點進(jìn)行雕刻的外科工具。
本發(fā)明還提供一種用來在關(guān)節(jié)的連接表面上作軟骨和/或軟骨細(xì)胞移植的用具盒，其中所述用具盒內(nèi)裝有止血屏障、無細(xì)胞半滲透覆蓋補(bǔ)片以及有機(jī)膠。在另一實施方案中，該用具盒帶可任選地裝有一種或多種能按照本發(fā)明所提供的方法對移植位點進(jìn)行雕刻的外科工具。


下面諸圖說明了本發(fā)明的某些性質(zhì)，通過這些圖可對本發(fā)明有更好的理解，這些圖為圖1A所示為一典型的關(guān)節(jié)骨端。典型地，在骨質(zhì)的鉸接表面上覆蓋了一層軟骨質(zhì)。
圖1B所示為一軟骨質(zhì)帽出現(xiàn)缺損或受傷(軟骨裂)的例子，這種缺損可以直接治療、稍予擴(kuò)大或在治療以前先用外科方法加以雕刻以接受移植物。
圖1C表示止血屏障(1)如何置放在軟骨質(zhì)帽的缺損內(nèi)以抑制或阻止血管化從原來的骨中進(jìn)入再生軟骨中。然后，將要植入缺損穴內(nèi)的軟骨細(xì)胞放置在該止血屏障的頂部上。
圖2所示為軟骨質(zhì)帽內(nèi)經(jīng)過治療的缺損(軟骨裂)被一層無細(xì)胞半滲透材料(2)所覆蓋，該材料(2)是用來在缺損位點上面形成一個蓋子/補(bǔ)片或繃帶的。此蓋子被安放在適當(dāng)?shù)奈恢蒙?，或是與穴邊緣的健康軟骨相縫接或是貼附在上面。此蓋子遮蓋住關(guān)節(jié)的缺損部位，培養(yǎng)好的軟骨細(xì)胞/軟骨或是預(yù)先放置在缺損部位內(nèi)，或是事后放到部分貼附在穴上的蓋子下面。
圖3A所示為分界區(qū)兩側(cè)的較硬軟骨和較軟軟骨對壓縮力和剪切力的不同響應(yīng)。
圖3B所示為缺損處經(jīng)過雕刻以后移植位點具有的波紋狀壁。
圖3C所示為處于關(guān)節(jié)表面軟骨(4)內(nèi)，帶有止血屏障(1)，移植物質(zhì)(3)和無細(xì)胞覆蓋補(bǔ)片(2)的經(jīng)過雕刻的移植位點。
圖4A所示為本發(fā)明外科器械的一個實施方案，圖中可見到切削牙(5)和凸出的定位銷(6)。右邊的截面圖所示為切削刀片的兩個可能的構(gòu)形。
圖4B所示為本發(fā)明外科器械的第二個實施方案。
圖5所示為移植位點經(jīng)過雕刻以后較硬軟骨和較軟軟骨對壓縮力和剪切力的不同響應(yīng)得到改良的情況。
圖6A為一頭豬膝部的磁共振圖象，顯示出在左(中)髁處的軟骨缺損。
圖6B為同一頭豬膝部治療后三個月時的磁共振圖象。
具體實施例方式
本發(fā)明提供一種通過一個止血屏障和一個覆蓋補(bǔ)片將適宜基質(zhì)中的軟骨細(xì)胞移植到待治療表面上來有效地治療關(guān)節(jié)連接表面軟骨的方法，包括將一個止血屏障放到緊貼待治療表面的位置上，將適宜基質(zhì)中的軟骨細(xì)胞放到待治療表面上的止血屏障的頂部，以及用一個覆蓋補(bǔ)片覆蓋在待治療表面上。
在本發(fā)明的上述方法中，所述覆蓋補(bǔ)片是首先被貼附到把移植位點覆蓋起來的軟骨表面上，然后將所述覆蓋補(bǔ)片下的所述軟骨放到所移植位點內(nèi)。
在本發(fā)明的上述方法中，所述覆蓋補(bǔ)片含有半滲透膠原基質(zhì)。
在本發(fā)明的上述方法中，所述覆蓋補(bǔ)片含有帶有一個疏松面的半滲透膠原基質(zhì)。
在本發(fā)明的上述方法中，所述疏松面與被移植的軟骨細(xì)胞接觸。
在本發(fā)明的上述方法中，覆蓋補(bǔ)片含有半滲透膠原基質(zhì)，該膠原基質(zhì)是基本上沒有完整細(xì)胞的；所述止血屏障是一種可吸收的半滲透材料，該材料抑制或阻止血管穿透屏障。并且其中所述止血屏障含有膠原。
本發(fā)明還提供一種通過一個移植位點、一個止血屏障和一個覆蓋補(bǔ)片把適宜基質(zhì)中的軟骨細(xì)胞移植到等治療表面的方法，包括首先對移植位點進(jìn)行雕刻，使得移植位點的壁成為非直線的和/或波紋形的，將一止血屏障放到經(jīng)雕刻的移植位點內(nèi)緊貼待治療表面的位置上，將適宜基質(zhì)中的軟骨細(xì)胞放到移植位點內(nèi)的止血屏障上，以及用覆蓋補(bǔ)片覆蓋在待治療表面上。
在本發(fā)明的上述方法中，所述覆蓋補(bǔ)片在軟骨細(xì)胞放到移植位點內(nèi)的止血屏障上之前已部分地貼附好。所述止血屏障是一種可吸收的半滲透材料，該材料抑制或阻止血管穿透屏障；其中所述止血屏障含有膠原。
在本發(fā)明的上述方法中，其中所述覆蓋補(bǔ)片為無細(xì)胞半滲透膠原基質(zhì)。
本發(fā)明還提供一個用于將軟骨細(xì)胞/軟骨移植到關(guān)節(jié)連接表面的用具盒，所述用具盒包括一個經(jīng)過預(yù)處理來抗吸收以適于置放到所述表面的止血屏障，一個經(jīng)過預(yù)先處理來抗吸收以適于覆蓋所述表面的覆蓋補(bǔ)片，以及適于將所述止血屏障和/或所述覆蓋補(bǔ)片貼附到所述表面上去的有機(jī)膠液。
在本發(fā)明的上述用具盒包括一個經(jīng)過處理來抗吸收的止血屏障，一個經(jīng)過處理來抗吸收的覆蓋補(bǔ)片，一種有機(jī)膠液，以及任選的用來雕刻移植位點壁的外科工具和任選的適于支承放入所述移植位點的軟骨細(xì)胞的基質(zhì)材料。
本發(fā)明還提供一種用來雕刻移植位點的外科工具，該移植位點包括鉸接骨軟骨表面內(nèi)的壁和底，該外科工具包括一個連接在一根桿或柄上的刀口，當(dāng)它在所述移植位點內(nèi)轉(zhuǎn)動或在圓周方向上刻劃時，該移植位點受到雕刻，因而移植位點的壁或為非直線的，或為任選的波紋形。
在上述的外科工具中，所述刀口成形為如圖4A或圖4B所示。
在上述的外科工具中，所述刀口成形為沿著一管狀或環(huán)狀桿表面盤旋上升的螺旋形刀片。
本發(fā)明涉及到某些產(chǎn)品的使用，這些產(chǎn)品在向軟骨的缺損處進(jìn)行自體軟骨細(xì)胞移植過程中能防止血管組織的形成，如能防止諸如毛細(xì)血管絆伸到正在建立的軟骨中去。來自原來的骨質(zhì)的血管組織的形成將傾向于伸到將要形成的新軟骨中去，這導(dǎo)致除了所要求的間質(zhì)的特殊軟骨細(xì)胞以外的其它細(xì)胞的出現(xiàn)。
由血管形成所導(dǎo)致的污染細(xì)胞可能侵蝕并過度發(fā)育而進(jìn)入通過軟骨細(xì)胞的植入而將要形成的軟骨中。商品中有一種叫做Surigcel(Ethicon有限公司，英國)的可以用在本發(fā)明中，它可以在7至14天后被吸收。這種材料在本發(fā)明的方法中的使用與諸如Surigcel包裝插頁中Ethicon有限公司所登載的止血器材的正常使用是相反的。
我們意外地發(fā)現(xiàn)，在希望防止軟骨內(nèi)血管形成的情況下，一種止血材料會起凝膠狀人造凝結(jié)物的作用。本應(yīng)當(dāng)出現(xiàn)在關(guān)節(jié)軟骨缺損處整個厚度內(nèi)的血紅細(xì)胞被這樣的止血屏障遮蓋住時，該血細(xì)胞會化學(xué)變化成高鐵血紅素，從而不能誘發(fā)血管發(fā)育。于是一種例如Surigcel這樣的止血產(chǎn)品用作血管再形成的抑制屏障(無論有沒有血纖蛋白粘結(jié)劑)，對于本發(fā)明所設(shè)想的方法都是有效的。本發(fā)明的另一部分內(nèi)容是使用一個無細(xì)胞元件作為補(bǔ)片來遮蓋住關(guān)節(jié)的受損部位，該受損部位中使用自體軟骨細(xì)胞培養(yǎng)出來的軟骨細(xì)胞/軟骨正在進(jìn)行移植。本發(fā)明的方法也考慮使用同種異體的軟骨細(xì)胞或異種的軟骨細(xì)胞來修理軟骨缺損。
因此，本發(fā)明教導(dǎo)了對關(guān)節(jié)的連接骨質(zhì)表面上的軟骨缺損進(jìn)行有效地修理或治療的方法，該方法包括提供一種藥劑或器件來阻斷血管向軟骨等修理位點的侵入；還包括提供一種無細(xì)胞的屏障來隔離修理位點并保持被移植細(xì)胞的應(yīng)有位置。因此本發(fā)明還提供一個用具盒，該工具盒中裝有用來放入待修理位點的止血屏障元件，這對血管形成的侵入待修理位點具有有效的抑制作用。一旦待移植的軟骨細(xì)胞放入待修理位點，一種無細(xì)胞半通透屏障便覆蓋在修理位點上，這使得軟骨細(xì)胞保持在正確的位置，而且仍能獲得通向營養(yǎng)素的通道。
一種采用體外實驗系統(tǒng)進(jìn)行的關(guān)于軟骨細(xì)胞在其與某種阻止血管組織形成的產(chǎn)品或幾種產(chǎn)品的復(fù)合物接觸時的行為的研究結(jié)果已經(jīng)給本發(fā)明的某些方面作了例證。該體外試驗結(jié)果預(yù)示了某些試驗物質(zhì)所具有的對血管形成的抑制能力，這種血管形成將發(fā)生在體內(nèi)對軟骨的缺損部位進(jìn)行軟骨細(xì)胞自體移植過程中，在該過程中毛細(xì)血管絆會伸入正在建立的軟骨中。
適用的止血產(chǎn)品將具有能抑制血管組織、骨細(xì)胞、成纖維細(xì)胞等發(fā)育或侵入正生長中的軟骨的特征。一種適用的止血材料必將實現(xiàn)本發(fā)明的方法的目標(biāo)，因為為了使軟骨的形成最佳，以及使關(guān)節(jié)軟骨中的任何缺損在整個厚度上都得到修復(fù)，應(yīng)當(dāng)防止血管以及細(xì)胞向正在發(fā)育的軟骨入侵。理想的情況是在整個軟骨得到修復(fù)的期間內(nèi)止血屏障都是穩(wěn)定的，而過了這段時間后是能被吸收的，否則便被分解掉。有一種鑒定為適用的材料叫做SurigcelW1912(一種可吸收止血劑，含有氧化再生的無菌纖維素；LotGG3DH，Ethicon有限公司，英國)。另一例適用材料為BioBide(一種商業(yè)供應(yīng)的I型膠原基質(zhì)襯墊；Geistlich Sohne瑞士)。
可以從商品中找到的適用的有機(jī)膠液材料例如為TisseelTissucol(血纖蛋白基粘結(jié)劑；ImmunoAG，奧地利)，粘性蛋白(Cat.#A-2707，SigmaChemical，美國)以及Dow Coming醫(yī)用粘結(jié)劑B(Cat.#895-3，Chemical，美國)。
本發(fā)明所考慮的外科工具可用適宜于制作一次性使用或多次重復(fù)使用外科工具的金屬和/或塑料制造。切削工具上的切削齒可以是整圓周的或平板的，或兩者之間的任何裝置。因為軟骨是一種相對較軟的物質(zhì)，用硬塑料切削刀刃來加工比較好，這樣就能在雕刻軟骨的時候不致?lián)p壞骨層。這種切削工具可以制成帶有通路的，以便用來引入液體、吸去切屑和液體以及插入用來對缺損位點進(jìn)行照明和觀察的光學(xué)纖維索。
通過下面幾個實例的說明可以對本發(fā)明的某些方面有更好的了解，這些實例的含意是對發(fā)明的說明，而不是對發(fā)明的限制。
實施例1為了使Surgice得以按照本發(fā)明用來阻止血管發(fā)育進(jìn)入自體移植的軟骨或軟骨細(xì)胞，首先要用戊二醛那樣的固定劑對Surgicel進(jìn)行處理。簡單地說，Surgicel要在0.6％戊二醛中處理1分鐘，然后多次清洗以去除殘留的戊二醛，否則可能會使組織中毒。也可以在進(jìn)行戊二醛處理之前，先將Surgicel用叫做Tisseel的血纖蛋白粘結(jié)劑如例2所述進(jìn)行處理。這里發(fā)現(xiàn)，Surgicel用戊二醛這樣的固定劑固定，并用無菌生理鹽水(0.9％)洗滌后在冰箱里保存1至2月不會分解。一般地說，外科用料在7至14天期間會被吸收。這個時間可能是太短了，因為在植入的軟骨細(xì)胞發(fā)育成為固態(tài)的軟骨層，從而得以從周圍的軟骨中獲取營養(yǎng)之前要阻止血管或血管化由骨結(jié)構(gòu)進(jìn)入所植入的軟骨需要一個更長的時間。換句話說，必須在更長的時間，例如1個月之內(nèi)能夠有效地防止血管形成。在這個時間之前，產(chǎn)品不應(yīng)顯著地被吸收；另一方面，產(chǎn)品最終必須被吸收。因此，用作抑制屏障的有機(jī)物質(zhì)都應(yīng)具有這些能力。已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，經(jīng)上述方法處理過的Surgicel具有這個功能。
實施例2在Surgicel上還包覆上一種有機(jī)膠液。在本例中，該膠液用的是Tisseel。但也可以采用其它膠液。該產(chǎn)品與Surgicel一起產(chǎn)生了一個對本發(fā)明的特殊目的適用的屏障。任何其它止血劑或血管抑制屏障均可以使用。Tisseel按后面所述的方法配制。Surgicel上包覆Tisseel的方法為先在Surgicel材料的兩面噴灑Tisseel直至濕透，然后讓Tisseel(血纖蛋白膠液)在室溫下固化。在完全固化之前要及時地將包覆好的Surgicel放入0.6％的戊二醛中1分鐘，然后用0.9％的無菌生理鹽水洗滌。然后用磷酸鹽緩沖鹽水(PBS)和/或NaOH調(diào)整PH值，直至PH值穩(wěn)定在7.2至7.4之間。在這之后，經(jīng)如此處理的Surgice要在諸如最低必需培養(yǎng)基/F12加15毫摩爾的Hepes緩沖劑組成的組織培養(yǎng)劑中洗滌。
如本例所述，我們使用了Tisseel作為血纖蛋白粘結(jié)劑來包覆Surgicel。除此之外，血纖蛋白粘結(jié)劑或膠液亦可直接加到損傷的底層，面向骨層，在這上面再粘上Surgicel。用來替代體內(nèi)試驗的體外試驗系統(tǒng)包括一個用作細(xì)胞研究的NUNCLONTMDelta 6穴無菌一次性使用培養(yǎng)皿。每個穴的直徑約為4厘米。
任何一種粘結(jié)劑，只要它與血纖蛋白組分一起制得的膠液可為人體所容許，便可用作本發(fā)明血纖蛋白粘結(jié)劑中的粘結(jié)劑(Ihara，N等，Burus Incl.Therm.Inj.，1984，10，396)。本發(fā)明亦考慮可用任何其它膠液成分來替代血纖蛋白粘接劑。在本發(fā)明中，我們用了Tisseel或Tissucol(ImmunoAG，Vienna，奧地利)。Tisseel用具盒裝有下列組分Tisseel，凍干，病毒滅活封閉劑，包括可凝蛋白質(zhì)、它的血纖蛋白質(zhì)、血漿纖連蛋白(CIG)和第十三因子以及纖溶酶原。
抑肽酶溶液(牛的)凝血酶4(牛的)凝血酶500(牛的)氯化鈣溶液Tisseel用具盒中還裝有一套DUPLOJECT涂敷系統(tǒng)。血纖蛋白粘結(jié)劑或使用Tisseel用具盒的雙成分封密劑用下文根據(jù)Immuno AG的產(chǎn)品盒插頁中的方法混合。
實施例3軟骨細(xì)胞在包含HAM F12和15毫摩爾的Hepes緩沖劑和5至7.5％的自身血清的最低必需培養(yǎng)基中放在37℃的CO2培養(yǎng)箱中培育。在丹麥哥本哈根的Verigen Europe A/S，Symbion Science Park的100級實驗室內(nèi)進(jìn)行操作。軟骨細(xì)胞還可能用別的成分的培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)。細(xì)胞用EDTA胰蛋白酶進(jìn)行5至10分鐘的胰酶消化，并在Burker-Turk箱中用臺盼蘭(Trypan Bule)生存力染色進(jìn)行計數(shù)。細(xì)胞計數(shù)調(diào)整到每毫升7.5×105個細(xì)胞。在100級實驗室中將一個NUNCLONTM培養(yǎng)皿啟封。
將Surgicel止血屏障切割成合適的尺寸，置放在NUNCLONTM組織培養(yǎng)皿的井穴的底部。本例的具體情況為，尺寸約為4厘米的圓片(亦可為任何可能的尺寸)在無菌條件下放到6穴NUNCLONTMDelta細(xì)胞研究工作用無菌一次性使用培養(yǎng)皿(NUNC，IterMed，Roskilde，丹麥)的穴底上。放到穴底上的止血屏障按照例1中所述進(jìn)行過預(yù)處理。該處理明顯地延緩了Surgicel的吸收。該止血屏障然后在蒸餾水中洗幾次，接著又是幾次，直到未反應(yīng)的戊二醛被洗掉。再加上少量的含血清細(xì)胞培養(yǎng)基，它們將被吸收進(jìn)入止血屏障內(nèi)，同時會保持穴底的止血屏障潮濕。
每毫升約106個細(xì)胞的培養(yǎng)基直接放到止血屏障的頂上，分散在如上面所說用0.4％戊二醛預(yù)處理過的止血屏障的表面上。接下來將培養(yǎng)皿在CO2培養(yǎng)箱內(nèi)在37℃下培養(yǎng)60分鐘。然后小心地向裝有細(xì)胞的穴內(nèi)倒入2至5毫升含5至7.5％血清的組織培養(yǎng)基。為了避免濺到細(xì)胞上，在倒入培養(yǎng)基時，滴管口要與穴的側(cè)壁相切?？梢钥吹?，培養(yǎng)基的PH值是太低了(約6.8)。將PH值調(diào)到7.4至7.5。第二天，有些軟骨細(xì)胞已開始在止血屏障上生長并排列成簇，有一些細(xì)胞由于調(diào)整PH值之前暴露在低PH下而已經(jīng)死亡。培養(yǎng)皿要培養(yǎng)3至7天，第3天時要更換培養(yǎng)基。
培養(yǎng)期終了時，輕輕地倒出培養(yǎng)基，并倒入冷藏的作為細(xì)胞標(biāo)本和以后電子顯微鏡標(biāo)本的載體(止血屏障)的固定劑的、含0.1摩爾二甲次胂酸鈉鹽(亦稱作卡可酸鈉，用HCL將PH值調(diào)到7.4)的2.5％戊二醛。
實施例4軟骨細(xì)胞在包含HAM F12和15毫摩爾的Hepes緩沖劑和5至7.5％的自身血清的最低必需培養(yǎng)基中放在37℃的CO2培養(yǎng)箱中培育。在丹麥哥本哈根的Verigen Europe A/S，Symbion Science Park的100級實驗室內(nèi)進(jìn)行操作。軟骨細(xì)胞還可能用別的成分的培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)。細(xì)胞用EDTA胰蛋白酶進(jìn)行5至10分鐘的胰酶消化，并在Burker-Turk箱中用臺盼蘭(Trypan Bule)生存力染色進(jìn)行計數(shù)。細(xì)胞計數(shù)調(diào)整到每毫升7.5×105個細(xì)胞。在100級實驗室中將一個NUNCLONTM培養(yǎng)皿啟封。
用作止血屏障的Surgicel如例1所述那樣以0.6％的戊二醛處理1分鐘，并以0.9％無菌氯化鈉溶液或最好以PBS那樣的緩沖劑或MEM/F12那樣的培養(yǎng)劑清洗，因為在戊二醛處理以后，PH為6.8，而最好的應(yīng)當(dāng)為7.0至7.5。用DUPLOJECT系統(tǒng)將Tisseel噴灑在Surgicel的兩面，從而對Surgicel的兩面進(jìn)行了包覆，即為帶有血纖蛋白粘結(jié)劑的待用的補(bǔ)片。膠液在無菌條件下干燥至少3至5分鐘?！鞍病焙玫闹寡琳媳环诺絅UNCLONTMDelta細(xì)胞研究工作用的6穴無菌一次性使用培養(yǎng)皿的穴底，加上少量的血清的組織培養(yǎng)基，它們將被吸收進(jìn)入止血屏障。每毫升約106個細(xì)胞的含血清的組織培養(yǎng)基直接放到止血劑的頂上，分散在止血屏障的表面上。然后將培養(yǎng)皿在CO2培養(yǎng)箱內(nèi)在37℃下培養(yǎng)10分鐘。接下來小心地向裝有細(xì)胞的穴內(nèi)倒入2至5毫升含5至7.5％血清的組織培養(yǎng)基。為了避免濺到細(xì)胞上，在倒入培養(yǎng)劑時，滴管口要與穴的側(cè)壁相切。3到6天后，顯微鏡檢測表明，細(xì)胞正附著在Surgicel上并正在向里面生長。這很好地說明了Surgicel對軟骨細(xì)胞不顯現(xiàn)毒性。骨細(xì)胞在Surgicel中以良好的方式生長。
培養(yǎng)皿培養(yǎng)3到7天，第3天時要更換培養(yǎng)基。培養(yǎng)期終了時，輕輕地倒出培養(yǎng)基，并倒入冷藏的作為細(xì)胞標(biāo)本和以后電子顯微鏡標(biāo)本的載體(止血屏障)的固定劑的、含0.1摩爾二甲次胂酸鈉鹽(亦稱作卡可酸鈉，用HCL將PH值調(diào)到7.4)的2.5％戊二醛。
實施例5軟骨細(xì)胞在包含HAM F12和15毫摩爾的Hepes緩沖劑和5至7.5％的自身血清的最低必需培養(yǎng)基中放在37℃的CO2培養(yǎng)箱中培育。在丹麥哥本哈根的Verigen Europe A/S，Symbion Science Park的100級實驗室內(nèi)進(jìn)行操作。細(xì)胞用EDTA胰蛋白酶進(jìn)行5至10分鐘的胰酶消化，并在Burker-Turk箱中用臺盼蘭(Trypan Bule)生存力染色進(jìn)行計數(shù)。細(xì)胞計數(shù)調(diào)整到每毫升7.5×105至2×106個細(xì)胞。在100級實驗室中將一個NUNCLONTM培養(yǎng)皿啟封。
已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，Bio-Gide可以作為一種可吸收的雙層薄膜來用作覆蓋在關(guān)節(jié)缺損部位上的補(bǔ)片或繃帶，該缺損內(nèi)放置有止血屏障和正在移植的培育軟骨細(xì)胞。Bio-Gide是由標(biāo)準(zhǔn)的受控加工工藝過程生產(chǎn)出來的一種純膠原薄膜(由E.D.Geistlish Sohne AG，CH-6110 Wolhusen生產(chǎn))。該膠原是從獸醫(yī)認(rèn)證的豬身上萃取，經(jīng)小心地精制以避免抗原反應(yīng)，并在雙重泡形罩內(nèi)以伽瑪射線消過毒的。該薄膜是用I型和III型膠原制成的，沒有經(jīng)過進(jìn)-步的交聯(lián)或化學(xué)反應(yīng)。膠原可在24周以內(nèi)被吸收。薄膜甚至在濕的時候也能保持其結(jié)構(gòu)完整性，并且可以用縫合線或釘子來固定。也可用Tisseel那樣的血纖蛋白粘結(jié)劑來替代縫合線或是與縫合線一起將薄膜“膠合”在周圍的軟骨或組織上。
在100級實驗室中將Bio-Gide啟封，并且在無菌的條件下將其放入到細(xì)胞研究工作用NUNCLONTMDelta 6穴無菌一次性使用培養(yǎng)皿的穴底部，雙層薄膜或是疏松面朝上或是致密面朝上。每毫升約106個細(xì)胞的含血清的組織培養(yǎng)基直接放到Bio-Gide頂上，分散在Bio-Gide的疏松表面或致密表面上。將培養(yǎng)皿在CO2培養(yǎng)箱內(nèi)在37℃下培養(yǎng)60分鐘，然后小心地向裝有細(xì)胞的穴內(nèi)倒入2至5毫升含5至7.5％血清的組織培養(yǎng)基。為了避免濺到細(xì)胞上，在倒入培養(yǎng)基時，滴管口要與穴的側(cè)壁相切。
在軟骨細(xì)胞放入帶有Bio-Gide的穴內(nèi)二天之后，用一臺Nikon倒裝顯微鏡來對細(xì)胞進(jìn)行檢測。我們注意到，有些軟骨細(xì)胞附著在Bio-Gide的邊緣上。當(dāng)然用顯微鏡是不可能透過Bio-Gide看它自己的。
培養(yǎng)皿培養(yǎng)3至7天，第3天時要更換培養(yǎng)基。培養(yǎng)期終了時，輕輕地倒出培養(yǎng)基，將冷藏的、作為細(xì)胞標(biāo)本和Bio-Gide載體標(biāo)本的固定劑的含0.1M二甲次胂酸鈉鹽(也稱為卡可酸鈉，用HCL將PH值調(diào)到7.4)的2.5％戊二醛。該載體的疏松面或致密面上繁殖有細(xì)胞。然后將Bio-Gide補(bǔ)片送到丹麥Herlev醫(yī)院病理部作電子顯微鏡檢測。
電子顯微鏡檢測表明，繁殖在Bio-Gide致密面上的軟骨細(xì)胞沒有生長進(jìn)入Bio-Gide的膠原結(jié)構(gòu)中，而繁殖在疏松表面上的確實生長進(jìn)入了膠原結(jié)構(gòu)，而且還顯示有蛋白聚糖的存在，而沒有成纖維細(xì)胞構(gòu)造的征兆。此結(jié)果表明，當(dāng)膠原補(bǔ)片，例如Bio-Gide補(bǔ)片在縫合到軟骨缺損處時，補(bǔ)片的疏松面應(yīng)該朝下，面向?qū)⒁⑷肱嘤玫能浌羌?xì)胞的缺損位點。這樣，軟骨細(xì)胞便能透入膠原而形成一個平滑的，與未受損表面齊平的軟骨表面，而且在此區(qū)域內(nèi)將建立起平滑的蛋白聚糖層。反之，若膠原的致密表面朝向缺損里面，則植入的軟骨細(xì)胞便不與膠原合成一體，而細(xì)胞將不會形成如上所述的平滑表面。
實施例6軟骨細(xì)胞在包含HAM F12和15亳摩爾的Hepes緩沖劑和5至7.5％的自身血清的最低必需培養(yǎng)基中放在37℃的CO2培養(yǎng)箱中培育。在丹麥哥本哈根的Verigen Europe A/S，Symbion Science Park的100級實驗室內(nèi)進(jìn)行操作。細(xì)胞用EDTA胰蛋白酶進(jìn)行5至10分鐘的胰酶消化，并在Burker-Turk箱中用臺盼蘭(Trypan Bule)耐久性染色進(jìn)行計數(shù)。細(xì)胞計數(shù)調(diào)整到每毫升7.5×105至2×106個細(xì)胞。在100級實驗室中將一個NUNCLONTM培養(yǎng)皿啟封。
Bio-Gide用作可吸收的雙層薄膜也可以與Tisseel這樣的有機(jī)膠一起使用，但附加的抑肽酶含量要比Tisseel產(chǎn)品使用說明所說的正常值明顯地高。將抑肽酶增加到約25000KIU/ml，材料的吸收期將從正常范圍的幾天延長到幾個星期。
為了在體外檢驗該項性能，將Tisseel加到NUNCLONTM培養(yǎng)皿的穴底上，并且允許不完全凝固。然后將Bio-Gide那樣的膠原補(bǔ)片加到Tisseel上面并粘在穴底上。這樣的Bio-Gide和Tisseel組合是設(shè)計用作止血屏障的，它將抑制或阻止血管的發(fā)展或滲透進(jìn)入軟骨細(xì)胞移植區(qū)。這種復(fù)合膠原現(xiàn)在可用來既作為傷口底部緊貼待修理表面的止血屏障，同時又是軟骨形成的支撐物，因為膠原補(bǔ)片朝上的一面可以是疏松面，從而促進(jìn)軟骨細(xì)胞和軟骨基質(zhì)的滲透。這種復(fù)合膠原也可用來蓋在植入物頂上，膠原的疏松面朝下，面向植入的軟骨細(xì)胞和形成頂部的屏障。抑肽酶含量增高了的復(fù)合膠原又可以直接放入缺損處，靠本身的固有粘力粘附，而不需用Tisseel那樣的有機(jī)膠液，因而這種膠原補(bǔ)片既可用作止血屏障，又可將其疏松面朝向植入物的軟骨細(xì)胞/軟骨而用作修理位點/移植位點的無細(xì)胞蓋罩。另一個變型是由II型膠原組成的膠原補(bǔ)片(即使用Geistlich Sohne AG，CH-6110Wolhusen)。
這樣，本發(fā)明提供了一種復(fù)合膠原補(bǔ)片，所述補(bǔ)片具膠原基材料其抑肽酶組分增高，最好約為25000KIU/ml，與一種有機(jī)材料膠液配套使用。這里膠原組分為類似于Bio-Gide的可吸收雙層材料或II型膠原，而有機(jī)膠液為類似于Tisseel的材料。另一個實施方案為復(fù)合膠原補(bǔ)片不使用任何有機(jī)膠液來貼到修理位點上。
實施例7由于骨關(guān)節(jié)炎軟骨構(gòu)造已被削弱，植到受損軟骨移植位點中去的培育好的自體軟骨細(xì)胞的附著力會受到抑制，因此在新植入的軟骨/軟骨細(xì)胞和周圍的已有軟骨之間形成了一個邊緣區(qū)(分界線區(qū))。如果移植位點在作移植準(zhǔn)備時將壁面制備成為直的平滑的直線方式，則該邊緣區(qū)將是非常明顯的。在移植位點被切割成直線形時，跨越這種邊緣區(qū)兩邊的剪切力和壓縮力將對移植物作用以很大的力來將其排出。這個邊緣區(qū)以及材料沿著這個邊緣區(qū)的不同的運動將抑制移植材料與周邊材料之間的愈合。當(dāng)鄰接材料的硬度不相同時，這種邊緣區(qū)剪切會更惡化。在很多情況下，移植材料較周邊材料更軟，然而在某些骨關(guān)節(jié)炎病例中，周邊軟骨可能事實上較植入的軟骨細(xì)胞/軟骨還要硬。
所以，為了解決這個問題，本發(fā)明的方法教導(dǎo)了使用外科工具來雕刻移植位點的壁面，使壁面是非直線型的，因而提供了波紋狀表面，這將減輕邊緣區(qū)剪切力，并使移植材料得以錨固。也可以對移植位點整形，使其接近骨表面處的直徑大于遠(yuǎn)離骨表面并位于待修理軟骨表面處的直徑，因而存在一個“倒漏斗”效應(yīng)。表面上的狹窄開口將有助于減小邊緣區(qū)的剪切力，減輕移植物從移植位點的擠出。在一個優(yōu)選實施方案中，移植位點雕刻成類似一個可以擰入螺栓或螺釘?shù)穆菘?圖3B)，這可稱作“陰”和“陽”螺紋，因而提供了抵御移植位點對移植物的壓縮和排斥的機(jī)械阻力。
本發(fā)明所考慮的外科工具可用適宜于制作一次性使用或多次重復(fù)使用外科工具的金屬和/或塑料制造。因為軟骨是一種相對較軟的物質(zhì)，用硬塑料切削刀刃來加工較好，這樣就能在雕刻軟骨的時候不致?lián)p壞骨層。這種切削工具可以制成帶有通路的，以便用來引入液體、吸去切屑和液體以及插入用來對缺損位點進(jìn)行照明和觀察的光學(xué)纖維索。在工具的某些實施方案中，工具的基面可以具有凸出點或銷形構(gòu)造，這將有助于將工具導(dǎo)引并定位在移植位點內(nèi)。當(dāng)然，這樣的銷必定設(shè)計成對底下的骨層破壞最小。
盡管工具的切削表面可以是單齒的、多齒的，或象在金屬零件上加工螺孔的絲錐那樣成為螺旋形狀的，切削工具必須具有的性能為移植位點最后雕成的側(cè)面為波紋形的和非直線的。例如，在某些實施方案中，工具的切削刃可整修成類似于圖4A或圖4B所示的形狀。在繞著切削工具直徑的方向上，切削刃可以是平直的或是圓形的。可以設(shè)計出很多其它形狀來達(dá)到本發(fā)明的方法的目的，產(chǎn)生一個界面來對作用在移植材料和周邊材料上的壓縮和剪切力所引起的各種反作用力提供機(jī)械阻抗。
實施例8一頭出生四個月的約克郡混種豬在受到一般的麻醉后腹部朝上地平躺著。豬在經(jīng)過清洗后送進(jìn)亞利桑那州費尼克斯Harrington炎研究中心的外科手術(shù)室。整個外科程序是在無菌狀態(tài)下實施的。豬的左后腿和鄰近的腿關(guān)節(jié)部以及腹股溝區(qū)域用碘酒清洗。膝關(guān)節(jié)作了定位并固定髕骨。從髕骨后部起做個約3厘米的正中切口，并基本上割去皮下組織、肌肉層和韌帶，形成通向中股髁的通道。用一圓形切割器在覆蓋在中髁后中部上的白軟骨內(nèi)制造一個傷口，傷口與該軟骨的外緣間的邊緣寬度為0.5至1厘米。該0.5至1厘米大的缺損的位置是在中髁(左髁，見圖6A)承受尾部重量的部位內(nèi)。整個外科進(jìn)程中，左股骨上沒有用止血帶。皮膚和各層進(jìn)行了適當(dāng)?shù)目p合。
第3天時，又將動物帶進(jìn)外科手術(shù)室，與上面一樣地放在手術(shù)臺上并施以一般的麻醉。左后腿、腹部和腹股溝區(qū)域如上面所述用碘酒離子化(ionized)。割掉縫合線，打開手術(shù)區(qū)。注意到膝關(guān)節(jié)內(nèi)存在中度的血腫。除去血液凝塊并檢查缺損處。缺損中存在血液凝塊。將該血液凝塊除去。將一個具有陽螺紋形切削刃、尺寸相當(dāng)于傷痕的周邊或稍大的無菌外科工具小心地擰入缺損處。將一塊Bio-Gide補(bǔ)片剪裁成與缺損的底部尺寸相同。將一種粘性蛋白(A-2707，Sigma Chemical，美國)首次用膠涂覆在經(jīng)過整修的止血屏障補(bǔ)片的致密面上，并將該補(bǔ)片致密面朝下放入傷痕的底部，形成上面所說的屏障。我們發(fā)現(xiàn)，該膠液似乎干得不是非?？?，此時傷痕底面輕微的出血立刻停止了。第二塊Bio-Gide的周邊剪裁得比傷痕要大一些，并且如前面所說致密面朝上(所以其疏松面朝向移植物)地放在傷痕上。
然后將該無細(xì)胞覆蓋補(bǔ)片縫合在空穴上，留下一個邊緣敞著口，將要取出的軟骨細(xì)胞可從這個開口處注入移植位點。補(bǔ)片的四周邊緣涂蓋上第二次用膠，即Dow Corning醫(yī)用粘結(jié)劑B(Cat.#895-3，Dow Corning，美國)。這種第二次用膠干得非?？欤逸^首次用膠更有效。我們發(fā)現(xiàn)，在上述這一特定的操作過程中，在著手進(jìn)行蓋罩的縫合時，首次膠尚末充分干燥到可使止血屏障就位。緊貼移植位點表面上的主要屏障是由該膠液本身形成的。
用一個1毫升的注射管和一個16號針頭將約0.6毫升的軟骨細(xì)胞的細(xì)胞懸浮體吸入注射管的圓筒內(nèi)。再將16號針頭換成23號短針頭，并將細(xì)胞懸浮體(約10×106個細(xì)胞)注入所縫合的覆蓋補(bǔ)片下面的移植位點內(nèi)。接下來在撤出針頭之前粘合蓋罩的敞口邊緣，然后再小心地撤去針頭。沒有看到細(xì)胞的漏出。然后如前面那樣將傷口縫合，并且沒有使用止血帶，也沒有看到出血。最后將皮膚層縫合?？p合后沒有發(fā)生皮膚隆起，這表明不存在血腫。術(shù)后恢復(fù)是沒有事故的。
正如希望的那樣，植入的軟骨細(xì)胞所生成的軟骨基質(zhì)充分地修復(fù)了試驗豬膝關(guān)節(jié)軟骨表面內(nèi)所制造的缺損。圖6A為豬膝部的磁共振圖象，表示在膝內(nèi)(左髁，中髁)處造成的軟骨損傷；圖6B為同一頭豬膝部治療后三個月時的磁共振圖象，表示該缺損的修復(fù)。
實施例9
一個由實施本發(fā)明的方法有用的元件組成的用具盒可使本發(fā)明的方法在外科移植中得以方便地實施。在一個優(yōu)選實施方案中，本發(fā)明的用具盒將提供適于在外科條件下容易地使用的無菌元件，并將提供適用的止血屏障、適用的覆蓋補(bǔ)片，如果需要還將提供有機(jī)膠液。一個本發(fā)明的用具盒還可提供無菌的，適于用來承載自體軟骨細(xì)胞的無細(xì)胞基質(zhì)材料，該自體軟骨細(xì)胞是將植入關(guān)節(jié)鉸接表面缺損內(nèi)的。在一個實施方案中，一個本發(fā)明的用具盒內(nèi)裝有Surgicel止血屏障和帶有適宜的涂覆層Tisseel有機(jī)膠的Bio-Gide覆蓋補(bǔ)片。這里的Surgicel和Tisseel是已經(jīng)按照本發(fā)明的教導(dǎo)作了延長吸收時間處理的。在Tisseel預(yù)先涂覆好的情況下，在一個實施方案中，Tisseel增補(bǔ)了額外的抑肽酶來增長吸收時間。
在另一個優(yōu)選實施方案中，止血屏障和覆蓋補(bǔ)片二者都是一種半滲透膠原基質(zhì)，它們都是經(jīng)過處理來延長吸收時間的。也還可能以增強(qiáng)型的形式將Tisseel膠液作為獨立的組分來提供，在需要的時候再涂覆。這是因為每個修復(fù)/移植程序會遇到的固有可變性以及各種獨特的情況。
本發(fā)明用具盒的又一個實施方案內(nèi)裝有如例7中所說的那種外科工具或它的適用的改進(jìn)型。
本專業(yè)人員都了解，由具體的實施方案所表示的本發(fā)明可以進(jìn)行許多變更和/或修改，這些變更和/或修改沒有脫離本發(fā)明的所述精神和范圍。
權(quán)利要求
1.一種用來雕刻移植位點的外科工具，該移植位點包括鉸接骨軟骨表面內(nèi)的壁和底，該外科工具包括一個連接在一根桿或柄上的刀口，當(dāng)它在所述移植位點內(nèi)轉(zhuǎn)動或在圓周方向上刻劃時，該移植位點受到雕刻，因而移植位點的壁或為非直線的，或為任選的波紋形。
2.如權(quán)利要求1的外科工具，其中所述刀口成形為如圖4A或圖4B所示。
3.如權(quán)利要求1的外科工具，其中所述刀口成形為沿著一管狀或環(huán)狀桿表面盤旋上升的螺旋形刀片。
全文摘要
本發(fā)明公開了向關(guān)節(jié)連接面缺損部分進(jìn)行有效的軟骨細(xì)胞/軟骨移植的方法以及實施本發(fā)明所用的特定工具和用具盒。
文檔編號A61F2/28GK1500447SQ03155328
公開日2004年6月2日 申請日期1997年8月29日 優(yōu)先權(quán)日1996年8月30日
發(fā)明者亨里克·維伯－漢森, 夏洛特·倫斯戈德, 阿曼德·伊道雷恩, 庫爾特·B·奧瑟爾, B 奧瑟爾, 伊道雷恩, 倫斯戈德, 亨里克 維伯-漢森 申請人:維里根國際移植服務(wù)股份公司