專利名稱：免疫球蛋白a分泌促進(jìn)劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及可望具有對細(xì)菌和病毒等感染預(yù)防效果和過敏預(yù)防效果的IgA分泌促進(jìn)劑，特別是可望具有在上呼吸道的IgA分泌促進(jìn)效果的組合物。
背景技術(shù)：
在口腔、呼吸道、消化道等生物體內(nèi)部與外界相連的表面上構(gòu)筑有為了防止病毒和細(xì)菌等從外界侵入生物體內(nèi)的被稱為粘膜免疫的強(qiáng)有力的防御體系。在粘膜表面，從唾液腺和粘液腺等源源不斷地分泌粘液，在對病毒和細(xì)菌的侵入進(jìn)行物理防御的同時，通過粘液中存在的抗體、抗菌肽、酶等的作用，防御生物體受到外敵入侵。在所述防御體系中承擔(dān)中心作用的是免疫球蛋白A (IgA)抗體，具有除去病毒和細(xì)菌等以及防止它們在粘膜表面粘附等的作用(非專利文獻(xiàn)I)。 關(guān)于IgA抗體和感染癥的關(guān)系，報道了在動物實驗中使對于中耳炎的病因菌的特異性IgA抗體增加以及病因菌的感染被抑制的研究結(jié)果(非專利文獻(xiàn)2)。此外，報道了如果將某種感冒的病因病毒的特異性IgA抗體經(jīng)由鼻腔給藥，病毒的感染被抑制的研究結(jié)果(非專利文獻(xiàn)3)。此外，認(rèn)為IgA抗體除了具有預(yù)防生物體受到細(xì)菌和病毒等的感染的作用之外，還能阻止諸如引起過敏反應(yīng)的外來抗原從粘膜侵入生物體內(nèi)(非專利文獻(xiàn)4)。從以上的背景可知，如果能夠促進(jìn)IgA抗體的分泌，對于細(xì)菌和病毒等的感染癥預(yù)防和過敏的預(yù)防是有效的。迄今為止已公開的具有IgA抗體的分泌促進(jìn)作用的有各種乳酸菌和擔(dān)子菌(專利文獻(xiàn)I 4)、多糖類和低聚糖類(專利文獻(xiàn)5 9、非專利文獻(xiàn)5)，多數(shù)與腸內(nèi)的IgA抗體產(chǎn)生有關(guān)，而與口腔、鼻腔和呼吸道等呼吸系統(tǒng)的器官的IgA分泌促進(jìn)作用和感染抑制作用有關(guān)的僅是少數(shù)(專利文獻(xiàn)2、專利文獻(xiàn)10)?，F(xiàn)有技術(shù)文獻(xiàn)專利文獻(xiàn)專利文獻(xiàn)I :日本專利第2968374號公報專利文獻(xiàn)2 :日本專利第3818319號公報專利文獻(xiàn)3 :日本專利特開平11-92389號公報專利文獻(xiàn)4:日本專利特開2005-97133號公報專利文獻(xiàn)5 :日本專利第4162147號公報專利文獻(xiàn)6:日本專利特開2001-64181號公報專利文獻(xiàn)7:日本專利特開2003-201239號公報專利文獻(xiàn)8:日本專利特開2006-70217號公報專利文獻(xiàn)9:日本專利特開2006-213671號公報專利文獻(xiàn)10:日本專利特開2009-161447號公報專利文獻(xiàn)11:日本專利特開2002-370993號公報
非專利文獻(xiàn)非專利文獻(xiàn)IBrandtzaeg P. > International Journal of MedicalMicrobiology (《醫(yī)學(xué)微生物學(xué)國際期刊》)、2003年、293卷、I號、3 15頁、Role ofsecretory antibodies in the defence against infections (分泌抗體在防御感染中的作用).非專利文獻(xiàn)2HotomiM.等、Vaccine (《疫苗》)、1998年、16卷、20號、1950 1956 頁、Specific mucosal immunity and enhanced nasopharyngeal clearance ofnontypeable Haemophilus influenzae after intranasal immunization with outermembrane protein P6and cholera toxin (非典型流感嗜血桿菌在鼻內(nèi)用外膜蛋白P6和霍亂毒素免疫后的特殊粘膜免疫和增強(qiáng)的鼻咽清潔)·非專利文獻(xiàn)3Heikkinen T.等、Pediatric Infectious Disease Journal (《兒科感染病醫(yī)學(xué)期刊》)、1998 年、17 卷、5 號、367 372 頁、Intranasally administered immunoglobulin for the prevention of rhinitis in children (用于預(yù)防兒童鼻炎的鼻腔內(nèi)給藥免疫球蛋白).非專利文獻(xiàn)4池澤善郎、低7·> X —食品0開発(《低能量食品的開發(fā)》)、V 一工 A (CMC)出版、41-49 頁非專利文獻(xiàn)5Scholtens P. A.等、Journal of Nutrition(《營養(yǎng)學(xué)雜志》)、2008年、138 卷、6 號、1141 1147 頁、Fecal secretory immunoglobulin A is increased inhealthy infants who receive a formula with short—chain galacto-oligosaccharidesand long-chain fructo_oligosaccharides(糞便分泌免疫球蛋白A在服用短鏈半乳糖-低聚糖和長鏈果糖低聚糖處方的健康嬰兒中被促進(jìn))·

發(fā)明內(nèi)容
鑒于上述課題，本發(fā)明的目的在于提供不僅在腸內(nèi)而且在口腔和呼吸道內(nèi)也具有IgA分泌促進(jìn)作用的醫(yī)藥組合物。發(fā)明人深入研究，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，虞美人(t f Y '>)提取物具有IgA分泌促進(jìn)作用，并由此完成了本發(fā)明。本發(fā)明的含有虞美人提取物的IgA分泌促進(jìn)劑不僅具有腸內(nèi)的IgA分泌促進(jìn)效果，在口腔和呼吸道內(nèi)也具有IgA分泌促進(jìn)作用，因此，通過攝取所述IgA分泌促進(jìn)劑，可以抑制病毒和細(xì)菌的感染，此外也能預(yù)防過敏的發(fā)生。
具體實施例方式本發(fā)明中具有IgA分泌促進(jìn)作用的虞美人(學(xué)名Papaver rhoeas L.)是S粟科植物，別名為虞美人草。據(jù)稱具有鎮(zhèn)靜、催眠、止痛作用等，用于止咳藥和鎮(zhèn)靜劑。與含有草藥的免疫賦活劑有關(guān)的專利(專利文獻(xiàn)11)中，草藥的例子僅記載了罌粟，但是缺乏發(fā)明的具體性，也沒有關(guān)于IgA的記載。此外，本發(fā)明中使用的虞美人提取物可以使用水或水與親水性有機(jī)溶劑的混合物提取虞美人的花、葉、莖，優(yōu)選虞美人的花。提取方法和溶劑的種類沒有特別限定。作為溶劑，除了水之外，可以使用乙醇、甲醇、丙醇、甘油、丙二醇等醇類，醚、丙酮、乙酸乙酯、氯仿、己烷等有機(jī)溶劑，或它們的混合溶齊U。但出于安全性方面的考慮，理想的是使用乙醇或其混合溶液提取。作為獲得提取物的提取條件，可以在高溫、室溫、低溫的任一種溫度下提取，優(yōu)選在40 90°C提取O. 5 5小時左右。提取物可以以溶液的狀態(tài)直接使用，也可以進(jìn)一步過濾、蒸餾除去提取溶劑后，通過減壓干燥或冷凍干燥制成粉末狀，或濃縮后使用。此外，也可以使用通過有機(jī)溶劑分配、柱色譜法等將這些提取物分離純化而得的制品。進(jìn)而，也可以加入除臭、脫色等純化處理。虞美人提取物的含量沒有特別限定，優(yōu)選相對于飲食物或制劑，換算成干燥重量含有O. 01重量％以上，更優(yōu)選O. I 90重量％。虞美人提取物的攝取方法也沒有特別限定，可以是口服攝取、通過舌下給藥攝取、 通過鼻腔給藥攝取、皮下或血管內(nèi)等局部直接給藥等所有公知的方法。含有本發(fā)明的虞美人提取物的醫(yī)藥組合物可以作為藥品、醫(yī)藥部外品(準(zhǔn)藥物，介于藥品和化妝品之間的一類)或飲食品等使用。為藥品時，以口服制劑的形式給藥。作為口服制劑的劑型，可例舉片劑、膠囊劑、散齊U、糖漿劑、飲劑等。為醫(yī)藥部外品時，以片劑、膠囊劑、飲劑等劑型使用。為飲食品時，除了飲料等飲品和糖果、脆餅、餅干等食品以外，可例舉煙草和口香糖等嗜好品、飼料和飼料類、漱口劑和牙膏等化妝品類等。這些只不過是例舉，本發(fā)明可以用于任何物品。為藥品或醫(yī)藥部外品時，可以含有藥理學(xué)上可接受的一種或兩種以上的載體，還可以根據(jù)需要含有其它用于治療的有效成分。除此之外，還可以含有賦形劑、粘合劑、崩解齊 、潤滑劑、分散劑、表面活性劑、增塑劑、混懸劑、乳化劑、稀釋劑、緩沖劑、抗氧化劑、細(xì)菌抑制劑等。此外，飲食品也可以含有食品制造上可接受的基材、載體、賦形劑、添加劑、增量劑、著色劑、香料等。虞美人提取物以外的成分也不受上文的限定，本發(fā)明可以任意含有公知的任何成分。含有本發(fā)明的虞美人提取物的藥品、醫(yī)藥部外品或飲食品等可以通過各技術(shù)領(lǐng)域內(nèi)公知的任意方法制造。其制造過程中可以通過公知的任何方法添加虞美人提取物。本發(fā)明的含有虞美人提取物的醫(yī)藥組合物不僅可以對人使用，也可以對人以外的動物(以下簡稱為非人動物)使用。作為非人動物，可例舉哺乳類、爬行類、兩棲類、魚類等人以外的動物。實施例以下利用實施例對本發(fā)明進(jìn)行說明，但這些實施例不對本發(fā)明的范圍造成任何限定。[實施例I]熱水提取物的制備粉碎IOOg虞美人花后，加入相對于試樣重量的10倍量的水，在70°C下提取2小時。過濾不溶物后，冷凍干燥提取液，得到熱水提取物37. 5g。[實施例2]使用來自派爾集合淋巴結(jié)(^工 >板；Peyer’ s patch)的淋巴球細(xì)胞的IgA抗體產(chǎn)生促進(jìn)作用的體外評價摘取小鼠(BALB/c系、雌、6周齡)的小腸,米集派爾集合淋巴結(jié),浸潰于含有2%牛胎兒血清(FCS)的RPMI1620培養(yǎng)基。用剪刀剪斷派爾集合淋巴結(jié)，用七> ^卜 >一于一(BD生物科技公司(BD Biosciences)制、孔徑70 μ m)回收淋巴球細(xì)胞。離心分離回收的細(xì)胞懸濁液，吸去上清液后，加入完全培養(yǎng)基，將淋巴球細(xì)胞懸濁液的細(xì)胞濃度調(diào)整為4 X IO6細(xì)胞/毫升。完全培養(yǎng)基使用含有KFoFCSJOyM 2-巰基乙醇、ImM丙酮酸鈉、100U/ml青霉素、100 μ g/ml鏈霉素的RPMI1620培養(yǎng)基。在96孔盤的各孔內(nèi)各加入溶解了淋巴球細(xì)胞懸濁液和試樣的培養(yǎng)基(試樣調(diào)整為最終濃度IOOppnOO. 05ml，在37°C、5% CO2的條件下培養(yǎng)I周?；厥张囵B(yǎng)液離心分離后，通過夾心ELISA法測定上清液中的總IgA抗體量。以不添加試樣培養(yǎng)的對照的總IgA抗體量為1，以相對值算出添加試樣培養(yǎng)時的總IgA抗體量。通過夾心ELISA法測定總IgA抗體量采用上述夾心ELISA法進(jìn)行的測定按照如下順序進(jìn)行。
將Ιμ/ml的抗鼠源免疫球蛋白抗體溶液加入96孔ELISA板，各ΙΟΟμ 1，4°C下使其反應(yīng)I晚，使抗體吸附在板上。從板上除去溶液，加入含有1%牛血清白蛋白(BSA)的磷酸鹽緩沖液(PBS)各180μ 1，在室溫下培養(yǎng)I小時，阻斷目的外蛋白質(zhì)的非特異性吸附。用含有O. 05%吐溫20的PBS (PBST)清洗各孔，然后加入試樣溶液，在室溫下培養(yǎng)2小時。用PBST清洗各孔，在各孔內(nèi)加入過氧化酶結(jié)合抗鼠源IgA抗體各25ng，在室溫下培養(yǎng)I小時，然后加入過氧化酶基質(zhì)使其反應(yīng)2分鐘。加入0. 5N鹽酸使反應(yīng)停止,測定450nm處的吸光度。使用鼠源IgA抗體作為標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)制作校準(zhǔn)曲線，測定IgA抗體量。結(jié)果如表I所示，以IOOppm的濃度添加虞美人(花)熱水提取物時培養(yǎng)基中IgA抗體量是什么都不添加時的2. 6倍。[表 I]
權(quán)利要求
1.一種IgA分泌促進(jìn)劑，其特征在于，含有虞美人提取物。
2.一種醫(yī)藥組合物，其特征在于，含有換算成干燥重量為0. 01% 90%的權(quán)利要求I所述的IgA分泌促進(jìn)劑。
3.如權(quán)利要求2所述的醫(yī)藥組合物，其特征在于，口服攝取。
4.如權(quán)利要求2所述的醫(yī)藥組合物，其特征在于，通過舌下給藥攝取。
5.如權(quán)利要求2所述的醫(yī)藥組合物，其特征在于，通過鼻腔給藥攝取。
6.一種食品，其特征在于，含有權(quán)利要求I所述的IgA分泌促進(jìn)劑。
7.—種醫(yī)藥組合物，其特征在于，含有權(quán)利要求I所述的IgA分泌促進(jìn)劑。
全文摘要
迄今已知的IgA抗體的分泌促進(jìn)劑中大多數(shù)與腸內(nèi)IgA抗體產(chǎn)生有關(guān)，而與口腔、鼻腔和呼吸道等呼吸系統(tǒng)的器官中的IgA分泌促進(jìn)作用和感染抑制作用有關(guān)的僅有極少數(shù)。因此，本發(fā)明的目的是提供不僅在腸內(nèi)而且在口腔和呼吸道等呼吸系統(tǒng)器官中也具有IgA分泌促進(jìn)作用的醫(yī)藥組合物。含有虞美人(ヒナゲシ)提取物的IgA分泌促進(jìn)劑不僅具有腸內(nèi)的IgA分泌促進(jìn)效果，在口腔和呼吸道內(nèi)也具有IgA分泌促進(jìn)作用，因此，通過攝取所述IgA分泌促進(jìn)劑，可以抑制病毒和細(xì)菌的感染，此外也能預(yù)防過敏的發(fā)生。
文檔編號A61P11/00GK102781457SQ20118001201
公開日2012年11月14日 申請日期2011年3月3日 優(yōu)先權(quán)日2010年3月4日
發(fā)明者吉田圭司郎, 國澤純, 志村進(jìn), 清野宏, 石塚智和 申請人:羅蒂株式會社