專(zhuān)利名稱(chēng)：一種蟾皮提取物干粉吸入劑及其制備方法、應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：

本發(fā)明涉及干粉吸入劑，具體的說(shuō)是蟾皮提取物制成的干粉吸入劑、所述干粉吸入劑的制備方法和在制備治療肺部腫瘤藥物中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
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華蟾素為蟾餘科(Bufonidae)動(dòng)物中華大蟾餘Bufobufo gargarizans Cantor的干燥皮經(jīng)提取純化制得的提取物，具有解毒、消腫、止痛之功效，用于治療中、晚期腫瘤、慢性乙型肝炎等癥，其生理活性物質(zhì)主要是蟾蜍毒素類(lèi)(bufotoxins)及其水解產(chǎn)物蟾毒配基類(lèi)(bufageins)、蟾毒色胺類(lèi)(bufoteinines)等。目前華蟾素注射劑、口服液、片劑已應(yīng)用于臨床，對(duì)肝癌、肺癌、胃癌等具有較好的療效。尤其華蟾素注射液，是從中華大蟾蜍皮經(jīng)加工制成的水溶性制劑，治療原發(fā)性肝癌和中晚期肺癌分別獲得44%和56%的綜合有效率，瘤體縮小率分別為10%和16%，且對(duì)化療和放療具有協(xié)同作用。華蟾素注射液臨床雖然不良反應(yīng)較少，但仍存在靜脈滴注會(huì)出現(xiàn)局部靜脈反應(yīng)，引起滴注靜脈收縮痙攣而致疼痛，長(zhǎng)期刺激致靜脈非特異性炎癥；皮膚反應(yīng)，主要表現(xiàn)為蕁麻疹和皮膚水皰樣損害；其次，少部分患者出現(xiàn)早搏、竇性心動(dòng)過(guò)緩、竇 性心動(dòng)過(guò)速、房室傳導(dǎo)阻滯等心血管系統(tǒng)反應(yīng)，產(chǎn)生的可能原因是華蟾素中少量的蟾毒配基所產(chǎn)生的心臟毒性反應(yīng)。此外，針劑需要在醫(yī)院內(nèi)使用，病人順應(yīng)性差。而華蟾素口服制劑需經(jīng)過(guò)肝臟的首過(guò)效應(yīng)，起效慢，制劑生物利用度較低。肺具有極大的表面積，肺泡壁是由單層細(xì)胞組成，使得藥物分子極易進(jìn)入血液，因此肺吸入給藥具有起效快、不良反應(yīng)小等諸多優(yōu)點(diǎn)。肺吸入給藥中干粉吸入劑(drypowderinhalers, DPIs)不使用拋射劑和溶劑，靠患者自主呼吸產(chǎn)生的氣流使藥物粉末霧化，進(jìn)而使藥物粉末傳遞到肺部，具有應(yīng)用方便、吸收迅速、無(wú)肝臟首過(guò)、速釋和靶向定位的特點(diǎn)，是一種新型的給藥系統(tǒng)。肺癌的發(fā)病率在全世界范圍內(nèi)正在迅速上升，已經(jīng)成為癌癥死因的第一位。當(dāng)前的抗腫瘤藥物大多數(shù)都是注射給藥，這種全身給藥方式不利于藥物蓄積于腫瘤部位，導(dǎo)致藥物的療效降低，不良反應(yīng)增多。采用定位給藥將抗腫瘤藥物運(yùn)送到人體的腫瘤病患部位，使藥物在病患部位的濃度提高，對(duì)降低藥物的毒副作用、提高藥物的治療效果具有重大的臨床應(yīng)用價(jià)值。采用經(jīng)肺給藥方式的吸入劑可將蟾皮提取物直接傳遞肺癌的病灶，有利于提高蟾皮提取物對(duì)肺癌的療效并降低其對(duì)正常組織的毒副作用。目前具有抗肺部腫瘤作用的蟾皮提取物干粉吸入劑的研究未見(jiàn)報(bào)道。發(fā)明內(nèi)容:
發(fā)明目的:本發(fā)明的一個(gè)目的是提供蟾皮提取物的肺部干粉吸入制劑及其制備方法。本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供本發(fā)明所述干粉吸入劑在制備治療肺部腫瘤藥物中的應(yīng)用。針對(duì)上述發(fā)明目的，本發(fā)明提供以下技術(shù)方案:
一種蟾皮提取物干粉吸入劑，其特征在于它是由蟾皮提取物與醫(yī)學(xué)上可接受的輔料組成，蟾皮提取物(按照干燥后所得固體物質(zhì)量)與所述的輔料的質(zhì)量比為1:0-1:110。
所述的一種蟾皮提取物干粉吸入劑，是由蟾皮提取物加入輔料制成的粉末，粉末團(tuán)聚形成可再分散顆粒；或者是蟾皮提取物負(fù)載在輔料顆粒表面形成顆粒；上述兩種顆粒的粒徑以D5tl計(jì)在0.5-1000微米之間。所述的蟾皮提取物，為蟾蜍科動(dòng)物中華大蟾蜍或黑眶蟾蜍等的皮經(jīng)提取純化制得的提取物。蟾皮提取物的制備方法為:
取蟾皮I份，加2-100倍量水，回流或者煎煮或者超聲或者微波或者浸提或者滲漉提取1-10次，每次0.1-48小時(shí)，合并水提液，濃縮至相對(duì)密度為1.01-1.50 (60-100°C )，加乙醇(65%-100%，W/W)沉淀，使乙醇含量達(dá)到50% (W/W)以上，靜置或離心或過(guò)濾處理，取上清液回收乙醇，得到蟾皮提取物或者濃縮、干燥后得到蟾皮提取物?；蛘?，取蟾皮I份，加2-100倍量水，回流或者煎煮或者超聲或者微波或者浸提或者滲漉提取1-10次，每次0.1-48小時(shí)，合并水提液，濃縮至相對(duì)密度為1.01-1.50(60-100°C)，加乙醇(65%-100%，W/W)沉淀，使乙醇含量達(dá)到50% (W/W)以上，靜置或離心或過(guò)濾處理，取上清液回收乙醇至無(wú)醇味，加乙醇(65%-100%，W/W)沉淀，使乙醇含量達(dá)到60%(W/W)以上，靜置或離心或過(guò)濾處理，取上清液回收乙醇至無(wú)醇味，得到蟾皮提取物或者濃縮、干燥后得到蟾皮提取物?；蛘?，取蟾皮I份，加2-100倍量水，回流或者煎煮或者超聲或者微波或者浸提或者滲漉提取1-10次，每次0.1-48小時(shí)，合并水提液，經(jīng)分子量500-5000的超濾膜超濾，得到蟾皮提取物或者濃縮、干燥后得到蟾皮提取物。或者，取蟾皮I份，加2-100倍量的一定濃度的乙醇(1%_100%，W/W)，回流或者超聲或者微波或者浸提或者滲漉提取1-10次，每次0.1-48小時(shí)，合并提取液，回收乙醇至無(wú)醇味，加0-100倍水，靜置或離心或過(guò)濾處理，得到蟾皮提取物或者濃縮、干燥后得到蟾皮提取物。或者，取蟾皮I份，加2-100倍量的一定濃度的乙醇(1%_100%，W/W)，回流或者超聲或者微波或者浸提或者滲漉提取1-10次，每次0.1-48小時(shí)，合并提取液，回收乙醇至無(wú)醇味，加0-100倍水，經(jīng)分子量500-5000的超濾膜超濾，得到蟾皮提取物或者濃縮、干燥后得到蟾皮提取物。所述的輔料選用糖、醇、氨基酸、磷脂、表面活性物質(zhì)、環(huán)糊精、高分子物質(zhì)、硬脂酸鎂、硬脂酸、硬酯富馬酸鈉、微粉硅膠、滑石粉中的一種或幾種混合物。所述的糖，可選用半乳糖、乳糖、葡萄糖、果糖、蔗糖、海藻糖、棉子糖中的一種或幾種混合物；所述的醇，可選用甘露醇、木糖醇、麥芽糖醇、山梨醇中的一種或幾種混合物；所述的氨基酸，可選用甘氨酸、門(mén)冬氨酸、丙氨酸、色氨酸、異亮氨酸、蘇氨酸、谷氨酸、苯丙氨酸、亮氨酸、胱氨酸、賴(lài)氨酸、脯氨酸、精氨酸中的一種或幾種；所述的磷脂，可選用大豆磷月旨、卵磷脂、磷脂酰膽堿、磷脂酰乙醇胺、合成磷脂中的一種或幾種；所述的表面活性物質(zhì)，可選用肺源性表面活性物質(zhì)如二棕櫚酰磷脂酰膽堿、二月桂酰磷脂酰膽堿、膽固醇中的一種或幾種混合物；所述的高分子物質(zhì)，可選用符合安全要求的高分子，優(yōu)選可生物降解的高分子物質(zhì)例如白蛋白、淀粉、聚乳酸、聚乳酸-羥基乙酸、聚乙二醇、泊洛沙姆、透明質(zhì)酸、透明質(zhì)酸鈉、海藻酸鈉中的一種或幾種混合物。優(yōu)選的方式為所述 輔料為吸入用乳糖顆粒平均粒徑在45-220微米與微粉化乳糖平均粒徑在1-10微米的混合物，其中乳糖顆粒與微粉化乳糖的質(zhì)量比為1000:1-1:1。最優(yōu)選的方式為乳糖顆粒與微粉化乳糖的質(zhì)量比為100:1-7:1。一種制備蟾皮提取物干粉吸入劑的方法，其制備步驟如下:
將蟾皮提取物通過(guò)粉碎或噴霧干燥制成粉末，包裝入膠囊或泡罩或干粉吸入器內(nèi)；將蟾皮提取物通過(guò)粉碎或噴霧干燥制成粉末，粉末與輔料混合均勻制成吸入用粉末，包裝入膠囊或泡罩或干粉吸入器內(nèi)；或者將蟾皮提取物與輔料混合均勻，通過(guò)粉碎或噴霧干燥制成吸入用粉末，包裝入膠囊或泡罩或干粉吸入器內(nèi)；或者將蟾皮提取物和處方中部分輔料混合均勻，通過(guò)粉碎或噴霧干燥制成粉末，粉末與處方中剩余輔料混合均勻制成吸入用粉末，包裝入膠囊或泡罩或干粉吸入器內(nèi)。一種制備蟾皮提取物干粉吸入劑的方法，其制備步驟如下:
將蟾皮提取物通過(guò)粉碎或噴霧干燥制成粉末，粉末與輔料混合均勻，團(tuán)聚形成可再分散顆粒，包裝入膠囊或泡罩或干粉吸入器內(nèi)；或者將蟾皮提取物與輔料混合均勻，通過(guò)粉碎或噴霧干燥制成粉末，團(tuán)聚形成可再分散顆粒，包裝入膠囊或泡罩或干粉吸入器內(nèi)；或者將蟾皮提取物和處方中部分輔料混合均勻，通過(guò)粉碎或噴霧干燥制成粉末，粉末與處方中剩余輔料混合均勻，團(tuán)聚形成可再分散顆粒，包裝入膠囊或泡罩或干粉吸入器內(nèi)；或者將蟾皮提取物通過(guò)粉碎或噴霧干燥制成粉末，粉末負(fù)載在輔料顆粒表面形成顆粒，包裝入膠囊或泡罩或干粉吸入器內(nèi)。 一種蟾皮提取物干粉吸入劑在制備肺部腫瘤藥物中的應(yīng)用。有益效果:1、肺具有極大的表面積，肺泡壁是由單層細(xì)胞組成，使得藥物分子極易進(jìn)入血液，因此肺吸入給藥具有起效快、不良反應(yīng)小等諸多優(yōu)點(diǎn)。肺吸入給藥中干粉吸入劑(drypowderinhalers, DPIs)不使用拋射劑和溶劑，靠患者自主呼吸產(chǎn)生的氣流使藥物粉末霧化，進(jìn)而使藥物粉末傳遞到肺部，具有應(yīng)用方便、吸收迅速、無(wú)肝臟首過(guò)、速釋和靶向定位的特點(diǎn)，是一種新型的給藥系統(tǒng)。目前有關(guān)于干粉吸入劑多用于治療呼吸道和肺部的感染，但未見(jiàn)在肺部腫瘤的治療。同時(shí)，具有抗肺部腫瘤作用的蟾皮提取物干粉吸入劑的研究也未見(jiàn)報(bào)道。目前蟾皮提取物注射劑、口服液、片劑已應(yīng)用于臨床，對(duì)肝癌、肺癌、胃癌等具有較好的效果。尤其是華蟾素注射液，是從中華大蟾蜍皮經(jīng)加工制成的水溶性制劑，治療原發(fā)性肝癌和中晚期肺癌分別獲得44%和56%的綜合有效率，瘤體縮小率分別為10%和16%，且對(duì)化療和放療具有協(xié)同作用。華蟾素注射液臨床雖然不良反應(yīng)較少，但仍存在靜脈滴注會(huì)出現(xiàn)局部靜脈反應(yīng)，引起滴注靜脈收縮痙攣而致疼痛，長(zhǎng)期刺激致靜脈非特異性炎癥；皮膚反應(yīng)，主要表現(xiàn)為蕁麻疹和皮膚水皰樣損害；其次，少部分患者出現(xiàn)早搏、竇性心動(dòng)過(guò)緩、竇性心動(dòng)過(guò)速、房室傳導(dǎo)阻滯等心血管系統(tǒng)反應(yīng)，產(chǎn)生的可能原因是華蟾素中少量的蟾毒配基所產(chǎn)生的心臟毒性反應(yīng)。此外針劑需要在醫(yī)院內(nèi)使用，病人順應(yīng)性差。而蟾皮提取物口服制劑需經(jīng)過(guò)肝臟的首過(guò)效應(yīng)，起效慢，制劑生物利用度較低。使用蟾皮提取物的干粉吸入劑主要是針對(duì)肺部腫瘤，直接作用于患部，同時(shí)不存在肝臟的首過(guò)效應(yīng)，起效快，并且沒(méi)有上述的不良反應(yīng)，對(duì)新藥開(kāi)發(fā)具有極大的前景。2、由于蟾皮提取物是混合物，其中含有吲哚堿類(lèi)物質(zhì)、華蟾酥毒基，脂蟾毒配基等，在實(shí)際操作中發(fā)現(xiàn)，加入一定配比的特定輔料能夠克服提取物粉碎到一定粒徑時(shí)而產(chǎn)生的靜電作用、內(nèi)聚力等引起的團(tuán)聚，減小吸濕性。申請(qǐng)人經(jīng)過(guò)大量實(shí)驗(yàn)獲知，特別是輔料選用乳糖顆粒與微粉化乳糖的混合物或者采用粉末團(tuán)聚技術(shù)可以做成吸入性能優(yōu)良的干粉吸入劑。
具體實(shí)施例方式下面結(jié)合實(shí)例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)說(shuō)明，但本發(fā)明的范圍并不受這些實(shí)例的任何限制。

實(shí)施例11、蟾皮提取物的制備:取干蟾皮洗凈，加10倍量水，煎煮2次，每次1.5小時(shí)，合并濾液，濃縮至相對(duì)密度為1.1-1.2 (850C )，冷卻至40°C，加乙醇沉淀，使含醇量達(dá)60%，靜置24小時(shí)，取上清液回收乙醇至無(wú)醇味，濃縮液加乙醇使含醇量達(dá)85%，靜置48小時(shí)，濾過(guò)，回收乙醇至稠膏，60°C干燥，得到蟾皮提取物。2、吸入劑的制備:將蟾皮提取物采用氣流粉碎至D5tl在5微米以下，與粒徑在45-70微米的乳糖按質(zhì)量比1:10進(jìn)行混合，將藥物粉末包裝入膠囊或泡罩或干粉吸入器內(nèi)，獲得吸入劑。
實(shí)施例21、蟾皮提取物的制備:取干蟾皮洗凈，加12倍量水，煎煮2次，每次2小時(shí)，合并濾液，濃縮至相對(duì)密度為1.2-1.3 (850C )，冷卻至40°C，加乙醇沉淀，使含醇量達(dá)70%，靜置24小時(shí),取上清液回收乙醇至無(wú)醇味,濃縮液加乙醇使含醇量達(dá)85%，靜置48小時(shí)，濾過(guò)，回收乙醇至無(wú)醇味，噴霧干燥，得到蟾皮提取物粉末，粉末D5tl在5微米以下。2、吸入劑的制備:將蟾皮提取物粉末、粒徑在45-80微米的乳糖、粒徑在20_50微米的亮氨酸按質(zhì)量比10:100:1的比例進(jìn)行混合，包裝入膠囊或泡罩或干粉吸入器內(nèi)，獲得吸入劑。
實(shí)施例31、蟾皮提取物的制備:取干蟾皮洗凈，加30倍量水，微波輔助提取3次，每次I小時(shí)，合并提取液，經(jīng)分子量1000的超濾膜超濾，超濾液噴霧干燥得到蟾皮提取物粉末，粉末D5tl在5微米以下。2、吸入劑的制備:將蟾皮提取物粉末包裝入膠囊或泡罩或干粉吸入器內(nèi)，獲得吸入劑。
實(shí)施例41、蟾皮提取物的制備:取蟾皮洗凈，加12倍量60%(W/W)的乙醇，回流提取2次，每次2小時(shí)，合并提取液，回收乙醇至無(wú)醇味，低溫冷藏48小時(shí)，濾過(guò)，加入0.3%的活性炭(W/V)，煮沸30分鐘，濾過(guò)，噴霧干燥，得到蟾皮提取物粉末。2、吸入劑的制備:將蟾皮提取物粉末、乳糖、甘露醇、甘氨酸、二月桂酰磷脂酰膽堿、卵磷脂、硬脂酸鎂按質(zhì)量比1:5:5:2:0.5:0.5:0.1的比例進(jìn)行混合，氣流粉碎至粉末D5q在5微米以下，將藥物粉末包裝入膠囊或泡罩或干粉吸入器內(nèi)，獲得吸入劑。
實(shí)施例51、蟾皮提取物的制備:取蟾皮洗凈，加20倍量的無(wú)水乙醇，回流提取2次，每次I小時(shí)，合并提取液，回收乙醇，經(jīng)分子量3000的超濾膜超濾，超濾液真空濃縮至比重為1.20(45°C )，浸膏50°C真空干燥，得到蟾皮提取物。2、吸入劑的制備:將蟾皮提取物、乳糖、膽固醇按1:8:1的比例進(jìn)行混合，氣流粉碎至粉末D5tl在5微米以下，將藥物粉末包裝入膠囊或泡罩或干粉吸入器內(nèi)，獲得吸入劑。實(shí)施例61、蟾皮提取物的制備:取蟾皮洗凈，加15倍量的60% (W/W)乙醇，回流提取3次，每次I小時(shí)，合并提取液，回收乙醇至無(wú)醇味，濃縮液加2倍量水沉，靜置24小時(shí)，高速離心，取上清液得到蟾皮提取物。2、吸入劑的制備:分別將上述蟾皮提取物中所含固形物質(zhì)量5倍、I倍、2倍的乳糖、聚乙二醇6000、白蛋白加入蟾皮提取物中，噴霧干燥，粉末D5tl在5微米以下，將藥物粉末包裝入膠囊或泡罩或干粉吸入器內(nèi)，獲得吸入劑。
實(shí)施例71、蟾皮提取物的制備:取蟾皮洗凈，加10倍量的10% (W/W)乙醇，回流提取2次，每次I小時(shí)，合并提取液，回收乙醇至無(wú)醇味，濃縮液高速離心，取上清液得到蟾皮提取物，噴霧干燥，得到蟾皮提取物，粉末D5tl在5微米以下。2、吸入劑的制備:將蟾皮提取物藥物粉末、粒徑在10-90微米的甘露醇、微粉化硅膠按質(zhì)量比10:89:1的比例進(jìn)行混合，混合均勻后包裝入膠囊或泡罩或干粉吸入器內(nèi)，獲得吸入劑。
實(shí)施例81、蟾皮提取物的制備:取蟾皮洗凈，加10倍量的50% (W/W)乙醇，回流提取2次，每次I小時(shí)，合并提取液，回收乙醇至無(wú)醇味，濃縮液高速離心，取上清液得到蟾皮提取物，噴霧干燥，得到蟾皮提取物粉末。2、吸入劑的制備:將蟾皮提取物藥物粉末、甘露醇、亮氨酸按質(zhì)量比10:100:3的比例進(jìn)行混合，混合后加水適量，噴霧干燥得到D5tl為4.8微米的粉末，用有聚合物內(nèi)襯的旋轉(zhuǎn)混合機(jī)混合，制成疏松的團(tuán)聚物，團(tuán)聚物的D5tl為390微米，包裝入膠囊或泡罩或干粉吸入器內(nèi)，獲得吸入劑。
實(shí)施例91、蟾皮提取物的制備:取蟾皮洗凈，加10倍量的40% (W/W)乙醇，回流提取3次，每次
0.5小時(shí)，合并提取液，回收乙醇至無(wú)醇味，濃縮液高速離心，取上清液得到蟾皮提取物，噴霧干燥，粉末D5tl在5微米以下。`2、吸入劑的制備:將蟾皮提取物粉末、甘露醇、亮氨酸按質(zhì)量比10:80:2的比例進(jìn)行混合，用有聚合物內(nèi)襯的旋轉(zhuǎn)混合機(jī)混合，制成疏松的團(tuán)聚物，團(tuán)聚物的D5tl為120微米，包裝入膠囊或泡罩或干粉吸入器內(nèi)，獲得吸入劑。
實(shí)施例101、蟾皮提取物的制備:取干蟾皮洗凈，加20倍量水，煎煮2次，每次2小時(shí)，合并濾液，濃縮至相對(duì)密度為1.2-1.3(85°C )，冷卻至40°C，加乙醇沉淀，使含醇量達(dá)70%，靜置24小時(shí),取上清液回收乙醇至無(wú)醇味,濃縮液加乙醇使含醇量達(dá)85%，靜置48小時(shí)，濾過(guò)，回收乙醇至無(wú)醇味，噴霧干燥，粉末D5tl在5微米以下。2、吸入劑的制備:將蟾皮提取物粉末、德國(guó)美劑樂(lè)InhaLac 70乳糖、微粉化乳糖(D50=5.1微米)按質(zhì)量比5:90:5的比例進(jìn)行混合,混合均勻后包裝入膠囊或泡罩或干粉吸入器內(nèi)，獲得吸入劑。3、吸入劑肺部沉積率考察按照中華人民共和國(guó)2010年版藥典規(guī)定方法考察，以制劑中蟾蜍噻嚀含量計(jì)，其肺部沉積率達(dá)到32.6%，室溫條件下放置18個(gè)月后，制劑中蟾蜍噻嚀的肺部沉積率沒(méi)有顯著變化。 實(shí)施例111、蟾皮提取物的制備:取干蟾皮洗凈，加20倍量水，煎煮2次，每次2小時(shí)，合并濾液，濃縮至相對(duì)密度為1.2-1.3(85°C )，冷卻至40°C，加乙醇沉淀，使含醇量達(dá)70%，靜置24小時(shí),取上清液回收乙醇至無(wú)醇味,濃縮液加乙醇使含醇量達(dá)85%，靜置48小時(shí)，濾過(guò)，回收乙醇至無(wú)醇味，噴霧干燥，粉末D5tl在5微米以下。2、吸入劑的制備:將蟾皮提取物粉末、德國(guó)美劑樂(lè)InhaLac 70乳糖、微粉化乳糖(D50=4.9微米)按質(zhì)量比3:95:1的比例進(jìn)行混合,混合均勻后包裝入膠囊或泡罩或干粉吸入器內(nèi)，獲得吸入劑。3、吸入劑肺部沉積率考察
按照中華人民共和國(guó)2010年版藥典規(guī)定方法考察，以制劑中蟾蜍噻嚀含量計(jì)，其肺部沉積率達(dá)到30.2%，室溫條件下放置18個(gè)月后，制劑中蟾蜍噻嚀的肺部沉積率沒(méi)有顯著變化。實(shí)施例121、蟾皮提取物的制備:取干蟾皮洗凈，加20倍量水，煎煮2次，每次2小時(shí)，合并濾液，濃縮至相對(duì)密度為1.2-1.3(85°C )，冷卻至40°C，加乙醇沉淀，使含醇量達(dá)70%，靜置24小時(shí),取上清液回收乙醇至無(wú)醇味,濃縮液加乙醇使含醇量達(dá)85%，靜置48小時(shí)，濾過(guò)，回收乙醇至無(wú)醇味，噴霧干燥，粉末D5tl在5微米以下。2、吸入劑的制備:將蟾皮提取物粉末、德國(guó)美劑樂(lè)InhaLac 70乳糖、微粉化乳糖(D50=5.5微米)按質(zhì)量比3:77:11的比例進(jìn)行混合,混合均勻后包裝入膠囊或泡罩或干粉吸入器內(nèi)，獲得吸入劑。3、吸入劑肺部沉積率考察
按照中華人民共和國(guó)2010年版藥典規(guī)定方法考察，以制劑中蟾蜍噻嚀含量計(jì)，其肺部沉積率達(dá)到29.8%，室溫條件下放置18個(gè)月后，制劑中蟾蜍噻嚀的肺部沉積率沒(méi)有顯著變化。實(shí)施例131、蟾皮提取物的制備:取干蟾皮洗凈，加10倍量水，煎煮2次，每次I小時(shí)，合并濾液，濃縮至相對(duì)密度為1.3-1.4(85°C )，冷卻至40°C，加乙醇沉淀，使含醇量達(dá)60%，靜置48小時(shí),取上清液回收乙醇至無(wú)醇味,濃縮液加乙醇使含醇量達(dá)80%，靜置48小時(shí)，濾過(guò)，回收乙醇至無(wú)醇味，噴霧干燥，粉末D5tl在5微米以下。2、吸入劑的制備:將蟾皮提取物粉末、亮氨酸按1:5的比例進(jìn)行混合，混合后顆粒的D5tl為292微米，包裝入膠囊或泡罩或干粉吸入器內(nèi)，獲得吸入劑。
實(shí)施例141、蟾皮提取物的制備:取干蟾皮洗凈，加6倍量水，煎煮5次，每次I小時(shí)，合并濾液，濃縮至相對(duì)密度為1.05 (700C )，冷卻至40°C，加乙醇沉淀，使含醇量達(dá)65%，靜置48小時(shí)，取上清液回收乙醇至無(wú)醇味，濃縮液加乙醇使含醇量達(dá)70%，靜置48小時(shí)，濾過(guò)，回收乙醇至無(wú)醇味，減壓濃縮，真空干燥得到蟾皮提取物。
2、吸入劑的制備:將蟾皮提取物與亮氨酸按1:1的比例進(jìn)行混合，氣流粉碎，粉末D5tl在5微米以下，將該粉末再與9倍量的甘露醇混合，混合后顆粒的D5tl為328微米，包裝入膠囊或泡罩或干粉吸入器內(nèi)，獲得吸入劑。
實(shí)施例151、蟾皮提取物的制備:取干蟾皮洗凈，加30倍量水，煎煮I小時(shí)，提取液濃縮至相對(duì)密度為1.30 (60°C )，冷卻至20°C，加乙醇沉淀，使含醇量達(dá)70%，靜置24小時(shí)，取上清液回收乙醇至無(wú)醇味，濃縮液加乙醇使含醇量達(dá)90%，靜置48小時(shí)，濾過(guò)，回收乙醇至無(wú)醇味，減壓濃縮，真空干燥得到蟾皮提取物。2、吸入劑的制備:將蟾皮提取物與泊洛沙姆按質(zhì)量比10:1的比例進(jìn)行混合，氣流粉碎，粉末D5tl在5微米以下，將該粉末再與8倍量的乳糖顆粒、I倍量的硬脂酸鎂混合，混合后顆粒的D5tl為653微米，包裝入膠囊或泡罩或干粉吸入器內(nèi)，獲得吸入劑。
實(shí)施例161、蟾皮提取物的制備:取蟾皮洗凈，加10倍量水，煎煮I小時(shí)，提取液濃縮至相對(duì)密度為1.20 (500C )，冷卻至室溫，加乙醇沉淀，使含醇量達(dá)50%，靜置24小時(shí)，取上清液回收乙醇至無(wú)醇味，濃縮液加乙醇使含醇量達(dá)70%，靜置48小時(shí)，濾過(guò)，回收乙醇至無(wú)醇味，減壓濃縮，真空干燥得到蟾皮提取物。 2、吸入劑的制備:將蟾皮提取物氣流粉碎，粉末D5tl在5微米以下，將該粉末再與20倍量的乳糖顆?；旌?，混合后顆粒的D5tl為286微米，包裝入膠囊或泡罩或干粉吸入器內(nèi)，獲得吸入劑。
實(shí)施例17
按照實(shí)施例1-16獲得吸入劑，進(jìn)行藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)，其中對(duì)比藥物為華蟾素注射液(市售)、蟾皮注射液A和B，蟾皮注射液A和B按照以下方法制備:
蟾皮注射液A:
取干蟾皮洗凈，加15倍量水，煎煮2次，每次2小時(shí)，合并濾液，濃縮至相對(duì)密度為1.2(850C )，冷卻至20°C，加乙醇沉淀，使含醇量達(dá)60%，靜置24小時(shí)，取上清液回收乙醇至無(wú)醇味，濃縮液加乙醇使含醇量達(dá)85%，靜置48小時(shí)，濾過(guò)，回收乙醇至無(wú)醇味，加水至每毫升相當(dāng)于原生藥5g，調(diào)節(jié)pH至6.5,0.45微米濾膜過(guò)濾，灌封，熱壓滅菌即得。蟾皮注射液B:
取干蟾皮洗凈，加20倍量60%乙醇，回流提取2次，每次2小時(shí)，合并提取液，回收乙醇至無(wú)醇味，加入3倍量水，低溫冷藏48小時(shí)，濾過(guò)，加入0.3%的活性炭(W/V)，煮沸30分鐘，濾過(guò)，加水至每毫升相當(dāng)于原生藥5g，調(diào)節(jié)pH至7，0.45微米濾膜過(guò)濾，灌封，熱壓滅菌即得。藥效實(shí)驗(yàn):
苯并芘經(jīng)皮穿刺肺內(nèi)注射的方法建立大鼠肺腫瘤動(dòng)物模型，取建模大鼠200只，隨機(jī)分為20組，每組10只。每天I次，用藥7天。給藥方式:第1-16組為實(shí)施例1-16的吸入劑吸入給藥，給藥劑量為15g生藥/kg ;第17組腹腔注射華蟾素注射液(市售)，給藥劑量:15g生藥/kg ;第18組腹腔注射蟾皮注射液A，給藥劑量:15g生藥/kg ;第19組腹腔注射蟾皮注射液B，給藥劑量:15g生藥/kg ;第20組為生理鹽水對(duì)照組，腹腔注射10mL/kg。停藥次日處死大鼠，解剖大鼠肺臟，觀(guān)察肺臟病變情況。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果:吸入劑給藥各組的大鼠的肺部出現(xiàn)腫塊或結(jié)節(jié)病變的發(fā)生率最低為10.5%，最高為30.3% ;華蟾素注射液組(市售)為60.5%，蟾皮注射液A組為50.1%，蟾皮注射液B組為60.8%，生理鹽水組為100%，吸入劑給藥各組與華蟾素注射液組(市售)、蟾皮注射液A組、蟾皮注射液B組、生理鹽水組在肺部病變發(fā)生率上有顯著性差異(P〈0.05)。實(shí)施例18
按照實(shí)施例1-16獲得吸入劑，進(jìn)行藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)，其中對(duì)比藥物為華蟾素注射液(市售)、蟾皮注射液A和B，蟾皮注射液A和B按照以下方法制備:
蟾皮注射液A:
取干蟾皮洗凈，加15倍量水，煎煮2次，每次2小時(shí)，合并濾液，濃縮至相對(duì)密度為1.2(850C )，冷卻至20°C，加乙醇沉淀，使含醇量達(dá)60%，靜置24小時(shí)，取上清液回收乙醇至無(wú)醇味，濃縮液加乙醇使含醇量達(dá)85%，靜置48小時(shí)，濾過(guò)，回收乙醇至無(wú)醇味，加水至每毫升相當(dāng)于原生藥5g，調(diào)節(jié)pH至6.5,0.45微米濾膜過(guò)濾，灌封，熱壓滅菌即得。蟾皮注射液B:
取干蟾皮洗凈，加20倍量60%乙醇，回流提取2次，每次2小時(shí)，合并提取液，回收乙醇至無(wú)醇味，加入3倍量水，低溫冷藏48小時(shí)，濾過(guò)，加入0.3%的活性炭(W/V)，煮沸30分鐘，濾過(guò)，加水至每毫升相當(dāng)于原生藥5g，調(diào)節(jié)pH至7，0.45微米濾膜過(guò)濾，灌封，熱壓滅菌即得。藥效實(shí)驗(yàn):1、家兔VX2原位肺癌模型的建立
I)荷瘤種兔的制作常規(guī)復(fù)蘇VX2腫瘤冰凍細(xì)胞懸液，制成106/mL的活細(xì)胞懸液，取ImL接種于I只兔右后腿外側(cè)肌肉內(nèi)，3周后于接種部位可捫及一直徑約30cm的腫塊，即制成荷瘤種兔。2)組織塊懸液的制備無(wú)菌條件下切取荷瘤種兔腿外側(cè)肌肉內(nèi)的腫瘤，取呈魚(yú)肉樣生長(zhǎng)旺盛的腫瘤組織，剪成泥狀。RPMI 1640培養(yǎng)液沖洗下過(guò)30目篩，去除單個(gè)細(xì)胞和過(guò)小的組織塊，篩上部分在RPMI 1640培養(yǎng)液沖洗下過(guò)20目篩，去除過(guò)大的組織塊。取篩下部分，離心沉淀后，取沉淀物2mL，加RPMI 1640培養(yǎng)液配制成組織塊懸液20mL。3)肺內(nèi)接種所有家兔右胸壁脫毛，肌內(nèi)注射速眠新合劑0.8mL/kg麻醉后固定，常規(guī)消毒，取無(wú)菌三通接頭，分別接12號(hào)注射針頭、吸有兔自身血凝塊的ImL注射器及吸有VX2腫瘤組織塊懸液或細(xì)胞懸液ImL的注射器。在X線(xiàn)透視下，將12號(hào)針頭刺入兔右肺下葉內(nèi)，回吸無(wú)血后,注入0.4mL組織塊懸液或細(xì)胞懸液，然后注入0.2mL兔自身血凝塊，拔出針頭，接種完畢。4)移植瘤生長(zhǎng)情況的觀(guān)測(cè)全部家兔自接種后第3天起，每日對(duì)胸部進(jìn)行層寬、層厚均為5mm的CT掃描，觀(guān)察腫瘤生長(zhǎng)、胸腔內(nèi)轉(zhuǎn)移情況。5)家兔VX2原位肺癌模型建立結(jié)果家兔全部有肺內(nèi)腫瘤生長(zhǎng)，接種成功率
100% O2、藥效實(shí)驗(yàn):
取成功建模家兔200只， 隨機(jī)分為20組，每組10只。每天I次，用藥12天。給藥方式:第1-16組為實(shí)施例1-16的吸入劑吸入給藥，給藥劑量:15g生藥/kg ;第17組腹腔注射華蟾素注射液(市售)，給藥劑量:15g生藥/kg ;第18組腹腔注射蟾皮注射液A，給藥劑量:15g生藥/kg ;第19組腹腔注射蟾皮注射液B，給藥劑量:15g生藥/kg ;第20組為生理鹽水對(duì)照組，腹腔注射10mL/kg。停藥次日處死家兔，解剖家兔肺臟，剝離腫瘤組織，稱(chēng)重。實(shí)驗(yàn)結(jié)果:吸入劑給藥各組的家兔的抑瘤率最小為58.7%，最高為64.3% ;華蟾素注射液組(市售)為56.3%，蟾皮注射液A組為45.1%，蟾皮注射液B組為48.9%，生理鹽水對(duì)腫瘤幾乎無(wú)抑制作用，吸入劑給藥各組與華蟾素注射液組(市售)、蟾皮注射液A組、蟾皮注射液B組、生理鹽水組 的抑瘤率有顯著性差異(P〈0.05)。
權(quán)利要求
1.一種蟾皮提取物干粉吸入劑，其特征在于它是由蟾皮提取物與醫(yī)學(xué)上可接受的輔料組成；所述蟾皮提取物的制備為:取蟾皮洗凈，加15倍量的60%乙醇，回流提取3次，每次I小時(shí)，合并提取液，回收乙醇至無(wú)醇味，濃縮液加2倍量水沉，靜置24小時(shí)，高速離心，取上清液得到蟾皮提取物；所述吸入劑的制備為:分別將上述蟾皮提取物中所含固形物質(zhì)量5倍、I倍、2倍的乳糖、聚乙二醇6000、白蛋白加入蟾皮提取物中，噴霧干燥，粉末D5tl在5微米以下，將藥物粉末包裝入膠囊或泡罩或干 粉吸入器內(nèi)，獲得吸入劑。
全文摘要
本發(fā)明涉及干粉吸入劑，具體的說(shuō)是一種蟾皮提取物制成的干粉吸入劑、所述干粉吸入劑的制備方法和在制備治療肺部腫瘤藥物中的應(yīng)用。一種蟾皮提取物干粉吸入劑，其特征在于它是由蟾皮提取物與醫(yī)學(xué)上可接受的輔料組成，蟾皮提取物與所述的輔料的質(zhì)量比為1:0-1:110。將一種蟾皮提取物制成干粉吸入劑，可直接作用于肺部病患，降低毒副反應(yīng)的發(fā)生，提高藥物的生物利用度，既可克服口服制劑起效慢，具有肝臟首過(guò)效應(yīng)，及全身性毒副作用，制劑生物利用度較低等缺點(diǎn)；同時(shí)也可解決針劑的使用不便，病人順應(yīng)性差等問(wèn)題。
文檔編號(hào)A61P11/00GK103070885SQ20121055804
公開(kāi)日2013年5月1日 申請(qǐng)日期2011年6月2日 優(yōu)先權(quán)日2011年6月2日
發(fā)明者陳彥, 張振海, 賈曉斌, 王晉艷, 賀俊杰 申請(qǐng)人:江蘇省中醫(yī)藥研究院