專利名稱：甲殺寄生物藥的制作方法
按照定義，寄生物是一類有機(jī)體，它們依靠，典型地是以損害其它的叫作“宿主”的有機(jī)體為生。動(dòng)物界的許多動(dòng)物門中都包括有寄生物，同樣，動(dòng)物界的許多不同的門中也都包括有宿主。大量的寄生物為下列各動(dòng)物門的成員扁形動(dòng)物門，吸蟲綱和絳蟲綱;
線形動(dòng)物門;和節(jié)肢動(dòng)物門，蜘蛛綱和昆蟲綱。
扁形動(dòng)物門和線形動(dòng)物門的動(dòng)物被非正規(guī)地稱作“蠕蟲”。這些種類典型地生活在宿主的腸道內(nèi)，在某些情況下也生活在其它的內(nèi)部器官中;這些種類被稱為“內(nèi)寄生蟲”。節(jié)肢動(dòng)物門的寄生物常被稱作“外寄生蟲”，因?yàn)榈湫偷姆N類往往攻擊宿主的身體外表面。能防治內(nèi)、外寄生蟲的藥劑有時(shí)被稱作“殺內(nèi)外寄生物藥”。
脊椎動(dòng)物是典型的宿主。人類當(dāng)然是許多寄生物的潛在宿主，在熱帶地區(qū)和衛(wèi)生條件很差的地區(qū)，寄生蟲感染是臨床上常見的疾病。大量的家禽家畜，如牛，羊，豬，山羊，雞，火雞，鴨，鵝等等，也常常遭受寄生蟲的侵害。同樣遭受寄生蟲侵害的還有馬以及水貂等等人工養(yǎng)殖的毛皮獸，和鼠，小鼠以及其它研究工作中用到的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物。與人為伴的動(dòng)物如狗和貓也常遭受寄生蟲侵害，由于它們和人的關(guān)系密切，這類寄生蟲也給貓狗的主人造成危害。魚類和其它水生動(dòng)物也遭受寄生蟲的侵害。簡言之，寄生現(xiàn)象幾乎遍及整個(gè)的脊椎動(dòng)物界。此外，寄生蟲與其宿主之間形成了許多種十分特異的相互作用，這使得它們很難被防治。很多寄生蟲生活在宿主體內(nèi)，通過這種途徑和其它途徑，寄生蟲很容易逃脫被防除的命運(yùn)。
寄生蟲感染造成的經(jīng)濟(jì)損失是驚人的。就畜牧業(yè)而言，寄生蟲感染使動(dòng)物的取食能力和生長率降低。乳產(chǎn)品和毛產(chǎn)品受到損害，羊毛、皮革和皮毛也受到損害。寄生蟲感染使得動(dòng)物對繼發(fā)的微生物感染和進(jìn)一步的寄生蟲的侵襲變得更加易感。因寄生蟲侵襲而致死也并非罕見。即使寄生蟲未給宿主造成嚴(yán)重危害，它也會(huì)引起不適。雖然目前使用著多種殺寄生蟲藥，但存在許多問題，包括殺蟲譜窄，需多次投藥，以及在很多情況下寄生蟲對藥物產(chǎn)生了抗性。因此，迫切需要新的殺寄生蟲藥。
本發(fā)明提供了一種新的工具用以防治寄生物，特別是通過取食血液而侵害宿主的那些“食血性”寄生物。所謂“取食血液”是說不僅包括那些刺吸宿主循環(huán)系統(tǒng)血液的寄生蟲，也包括那些吞噬宿主的組織因而必然損耗宿主血液的寄生蟲，典型地是節(jié)肢動(dòng)物寄生蟲。這種新的工具是一類叫作甲
的化合物。這類化合物中的許多是舊有的，見美國專利4，069，320號(hào)。該專利敘及主題化合物可用于防治昆蟲，如上所述，昆蟲中包括有寄生蟲。然而，美國專利4，069，320號(hào)的要義是，這類化合物可以觸殺的方法防治昆蟲，而這種方法不論多么有效，卻根本不可能用來防治食血性的寄生蟲。只有通過宿主的循環(huán)系統(tǒng)而達(dá)到系統(tǒng)防治的方法才能提供對食血性寄生蟲的真正有效的防治，而在4，069，320號(hào)專利中沒有給出有關(guān)這種系統(tǒng)防治的任何建議和教導(dǎo)。因此，本發(fā)現(xiàn)意外地提供了一種新的工具用來防治寄生物。
本發(fā)明涉及預(yù)防寄生物對宿主動(dòng)物的侵襲。
更詳細(xì)一點(diǎn)說，本發(fā)明主要地涉及一種方法，用以保護(hù)脊椎動(dòng)物宿主免受食血性寄生蟲的侵害，該方法包括給予動(dòng)物以有效量的具有殺寄生蟲活性的藥劑，該藥劑為式Ⅰ的化合物或其生理上可采用的鹽。
其中每個(gè)R分別代表下式殘基
其中R1為氰基;
R2為硝基;
R3為溴，氯或氟;
R4為碘或-R5nR6其中n代表0或1，R5代表-O-，-S-，-SO-，-SO2，或-OSO2-，和
R6代表-CF3，-CF2CF2H，-CH2CF3，or-C2F5;
并具有下列限制條件(1)至少有一個(gè)R帶有至少一個(gè)取代基，(2)當(dāng)一個(gè)R含有一個(gè)或多個(gè)R1，R2或R4取代基時(shí)，該R所含取代基的總數(shù)不超過3。
雖然如上所述本發(fā)明的基本方法是保護(hù)脊椎動(dòng)物宿主免受食血性寄生蟲的侵害，其它方法也包括在本發(fā)明的范圍之中。其中一種方法是給予脊椎動(dòng)物宿主以有效劑量的如上所限定的相同活性的藥劑，以保護(hù)該動(dòng)物免受非食血性內(nèi)寄生蟲的侵害。這些內(nèi)寄生蟲生活在(附著或不附著)宿主的消化道中，并以消耗宿主消化道的內(nèi)容物為生。例如毛園線蟲屬，細(xì)頸線蟲屬和絳蟲。本發(fā)明的化合物也可通過其它方法來使用，其中將上述限定的同一活性化合物作為殺幼劑服用。這種方法是給脊椎動(dòng)物、尤其是溫血?jiǎng)游锓栽摶衔镆詺缟钤谶@些動(dòng)物糞便中的寄生蟲，這些寄生蟲通常是卵或幼蟲階段的昆蟲。
本發(fā)明也包括那些以配伍使用(1)式Ⅰ的化合物和(2)一種已知的殺寄生蟲劑為特點(diǎn)的驅(qū)蟲方法以及同時(shí)含有上述(1)(2)兩種藥劑的組合物。這種“配伍”中優(yōu)選的已知?dú)⒓纳x劑為丙硫咪唑，苯硫噠唑，
氟苯噠唑，甲苯咪唑，磺唑氨酯，氧苯噠唑，立克苯噠唑，噻苯噠唑，和二氯苯噠唑;
和下述殺寄生蟲劑左旋咪唑，噻烯氫嘧啶，噻嘧啶，和哌嗪，或第二組的生理學(xué)上可采用的鹽。這些組合物能夠增強(qiáng)對寄生蟲的防治效果。
除了前述的新方法，本發(fā)明還涉及一些新的化合物。這些新化合物為(1)式Ⅰ的化合物，其中至少有一個(gè)R帶有一個(gè)-R5nR6取代基(其中n為1，R5為-OSO2-);(2)式Ⅰ所限定的所有化合物的季銨鹽，其中鹽的部分如下式
其中每個(gè)R7各分別選自1-20個(gè)碳原子的烷基，且所有四個(gè)R7基的碳原子總數(shù)為4-40;(3)式Ⅰ所限定的化合物的鹽，組合一種選自下述的已知的堿性殺寄生蟲化合物左旋咪唑，噻烯氫嘧啶，噻嘧啶或哌嗪。其它實(shí)施方案顯見于對本發(fā)明的如下所詳述。
本發(fā)明所用的化合物完全由下式限定
然而，正如4，069，320號(hào)專利所指出，本發(fā)明所用的化合物是上式和下面兩式的互變異構(gòu)體
為了一致，通篇只用三式中的第一式，但需說明，這個(gè)式子代表所有上述三式的互變異構(gòu)體以及它們的任意混合物，貫穿于本文的該唯一分子式也代表所有可能的順式和反式或?qū)ΨQ和不對稱的異構(gòu)體。
這些化合物是用美國專利4，069，320號(hào)所述的方法制備的，該專利被作為參考并入本發(fā)明。《化學(xué)評(píng)論》雜志上有一篇關(guān)于甲
的綜述性文章[Chem.Reviews，55，355-483(1955)]。為了方便讀者，下面扼要敘述其基本的合成方法。
在強(qiáng)酸性介質(zhì)中，于-20℃至100℃的溫度下(優(yōu)選溫度為0-40℃)，使式R-NH2表示的苯胺與亞硝基化劑反應(yīng)而重氮化。然后在一種水的介質(zhì)中，在-20℃至100℃的溫度下(優(yōu)選溫度為0-40℃)將生成的重氮鹽(R-N+2X-，其中X為Cl-，HSO-4，H2PO-4或其它來自酸的共軛離子)與下式表示的活潑的亞甲基化合物偶聯(lián)。
反應(yīng)最初產(chǎn)生一種腙類中間體
可在優(yōu)選pH4-6將此中間體分離出來。但若欲得到對稱化合物，每2摩爾的重氮鹽，使用1摩爾活潑的亞甲基化合物可得到最終產(chǎn)物，并可在pH4-12的條件下將其直接分離。若欲得到非對稱化合物，則用等摩爾量的第一種重氮鹽和活潑亞甲基化合物反應(yīng)，生成的腙類中間體(可分離亦可不分離)再與另一種不同的重氮鹽反應(yīng)。
用標(biāo)準(zhǔn)的方法制備鹽。典型的情況是甲
與一種金屬或氫氧化銨反應(yīng)，或者是鹽與已知的堿性殺寄生蟲化合物的情況下，甲
與特定的化合物反應(yīng)-不論哪種情況，反應(yīng)均在適宜的溶劑中進(jìn)行。
本發(fā)明的季胺鹽是新的
其制備方法是用甲
母體
與下式所表示的氫氧化季銨反應(yīng)
該反應(yīng)是在一種反應(yīng)介質(zhì)(典型的是水)中實(shí)施的，反應(yīng)溫度范圍很廣，以在室溫下反應(yīng)最方便。典型情況是鹽沉淀出來并經(jīng)過濾回收。
也可通過另一合成路線來制備季銨鹽。這條合成線路是將與上述相同的活潑亞甲基化合物與下式表示的氫氧化季銨反應(yīng)，
得到一種下式表示的化合物，
1，5-雙(4-三氟甲基磺酰氧)苯基)-3-甲
腈，熔點(diǎn)189-191℃。
一種不對稱的甲1-(4-(三氟甲基)苯基)-5-(4-(三氟甲基磺酰氧)苯基)-3-甲
腈，熔點(diǎn)182-184℃。
鹽1，5-雙(3，4-二氯苯基)-3-甲
腈的鈉鹽的制備將1，5-雙(3，4-二氯苯基)-3-甲
腈(1.0g;0.0026mol)與甲醇鈉(0.14g;0.0026mol)在300ml甲醇中反應(yīng)。將反應(yīng)物在室溫下攪拌過夜，然后過濾并使甲醇蒸發(fā)以得到所希望的產(chǎn)物，熔點(diǎn)312-314℃。
用氰乙酰胺的季胺鹽制備季胺鹽1，5-雙(4-(三氟甲基)苯基)-3-甲
腈的三甲基十八烷基銨鹽的制備將在20ml水中的亞硝酸鈉(9.10g;0.132mol)于0-5℃緩慢加到在200ml2NHCl中的4-(三氟甲基)苯胺(19.32g;0.12mol)溶液中。然后滴加在80ml水中的2-氰乙酰胺(5.04g;0.06mol)。將反應(yīng)物攪拌20分鐘，過濾，然后在室溫下將其滴加到在250ml2N氫氧化鈉和500ml甲醇混合液中的溴化三甲基十八烷基銨(35.0g;0.07mol)中。反應(yīng)物溫度會(huì)略有升高。將反應(yīng)物攪拌過夜。加入約1.5升水將反應(yīng)物攪拌。除去溶劑，產(chǎn)生約31.g桔紅色固體。將此固體與約100ml乙酸乙酯混合后過濾。產(chǎn)物熔點(diǎn)為86-88℃。
甲
/左旋咪唑鹽將0.1N氫氧化鈉(13ml)加到在10ml水中的鹽酸左旋咪唑中(0.33g;0.0014mol)。將游離的左旋咪唑提取到20ml二氯甲烷中，用水洗滌一次，用硫酸鎂干燥。然后將其加到在75ml二氯甲烷中的1，5-雙(4-(三氟甲基)苯基)-3-甲
腈(0.5g;0.0013mol)溶液中。將反應(yīng)物攪拌1小時(shí)，蒸掉二氯甲烷，留下一種粘性的固體。用此固體物做NMR分析，證實(shí)形成了1，5-雙(4-(三氟甲基)苯基)-3-甲
腈的左旋咪唑鹽。
該確證乃基于下述事實(shí)將1，5-雙(4-(三氟甲基)苯基)-3-甲
腈轉(zhuǎn)換成它的四甲基銨鹽，其NMR譜出現(xiàn)兩個(gè)明顯的改變，這兩個(gè)改變用左旋咪唑鹽也能觀察到。
芳族質(zhì)子1(5)-位質(zhì)子母體7.8-8.1ppm(多重譜線)12-13ppm四甲基銨鹽7.65ppm(銳鋒)-(電離的,質(zhì)子向高磁場移動(dòng))左旋咪唑鹽7.65ppm(銳鋒)-(電離的,質(zhì)子向高磁場移動(dòng))
同樣，將左旋咪唑轉(zhuǎn)換為它的鹽酸鹽，其NMR譜出現(xiàn)兩個(gè)明顯的改變，這兩個(gè)改變用甲
鹽也能觀察到。
芳族質(zhì)子6-位質(zhì)子2,3和5-位質(zhì)子母體7.35ppm5.3ppm(三重線)2.8-3.7ppm(多重譜線)鹽酸鹽7.4ppm5.7ppm(三重線)3.5-4.3ppm(多重譜線)甲
鹽 7.65ppm 5.45ppm(三重線) 3.1-3.9ppm(多重譜線)本發(fā)明中用到的、用前述合成方法制備的代表性化合物包括下表中所列各項(xiàng)。
其中的一些化合物比其它化合物更為優(yōu)選。優(yōu)選對稱的甲
，因?yàn)樗鼈內(nèi)菀字苽洹Ｎㄒ蛔顑?yōu)選的化合物是1，5-雙(4-(三氟甲基)苯基)-3-甲
腈及其鹽。在所有的鹽中，優(yōu)選以下式表示的季銨鹽，因?yàn)樗鼈內(nèi)苡谥?如植物油)而不溶于水。這些鹽在動(dòng)物體內(nèi)的生物利用度更高。
本發(fā)明的方法可用于保護(hù)宿主抵抗廣譜的寄生蟲。對于已被寄生蟲感染的動(dòng)物，通過清除業(yè)已存在的寄生蟲而起到這種保護(hù)作用;對于對寄生蟲的侵襲敏感的動(dòng)物，則通過阻止寄生蟲的侵襲而起到保護(hù)作用。因此，“保護(hù)”包括治療和預(yù)防兩方面的意義。
代表性的食血寄生物包括下列種種扁形動(dòng)物門吸蟲綱，例如枝睪屬棘口屬肝片形吸蟲(羊肝蛭)大擬片形吸蟲
片蟲屬后殖吸蟲屬并殖吸蟲屬血吸蟲屬線形動(dòng)物門鉤口線蟲屬管園線蟲屬無飾線蟲屬蛔蟲屬布魯氏線蟲屬仰口線蟲屬古柏線蟲屬網(wǎng)尾線蟲屬(肺蠕蟲)棘唇線蟲屬惡絲線蟲屬(心蠕蟲)飛線蟲屬絲線蟲屬凱捷線蟲屬尾錐球頭線蟲血矛線蟲屬后園線蟲屬(肺蠕蟲)繆勒氏線蟲屬(肺蠕蟲)美洲板口線蟲盤尾絲蟲屬奧斯脫絲蟲屬原園肺蟲屬(肺蠕蟲)腹腔絲蟲屬冠絲蟲屬比翼屬毒蛔蟲屬弓蛔蟲屬毛形屬狹頭鉤蟲斑氏吳策絲蟲節(jié)肢動(dòng)物門甲殼綱鲺屬魚虱屬蜘蛛綱美洲鈍眼蜱(得克薩斯鈍眼蜱)斑點(diǎn)鈍眼蜱(灣岸鈍眼蜱)波斯銳緣蜱(家禽銳緣蜱)微小牛蜱(牛蜱)牛蠕螨(牛泡螨)犬蠕螨(犬泡螨)安氏革蜱(洛磯山斑點(diǎn)熱蜱)變異革蜱(美國犬蜱)雞皮刺螨(雞螨)蓖子硬蜱(普通羊蜱)
革氏鳥疥螨(拔羽鳥疥螨)變異鳥疥螨(縢鳥疥螨)麥?zhǔn)隙?耳蜱)馬癢螨(疥螨)羊癢螨(疥螨)血紅扇頭蜱(棕色狗蜱)人疥螨(獸疥蜱)昆蟲綱
牛羽虱(叮牛虱)旋麗蠅(花蠅)斑虻屬種類(鹿蠅)溫帶臭蟲(居室臭蟲)犬櫛首蚤(犬蚤)貓櫛首蚤(貓?jiān)?庫蠓屬種類(小咬，糠皮子等)綿羊畜虱(叮羊虱)膚蠅屬種類(牛蠅)潛蚤屬種類(跳蚤)赤尾胃蠅(鼻馬蠅)腸胃蠅(普通馬蠅)
鼻胃蠅(頰蠅)舌蠅屬種類(采采蠅)西方角蠅(角蠅，水牛蠅)驢血虱(馬吸血虱)牛血虱(短鼻牛虱)綿羊毛虱(體虱)豬血虱(豬虱)致癢齒股蠅(頭蠅)牛皮蠅(炸蠅)紋蠅(踵蠅)綿羊毛虱(體虱)羊足毛虱(足虱)犢毛虱(長鼻牛虱)綠蠅屬種類(蛆蠅)羊蜱蠅(羊蜱蠅)羊狂蠅(鼻馬蠅)伏蠅(花蠅)騷玟屬獵蝽屬種類(刺蝽)蚋屬種類(黑蠅)牛管虱(小蘭牛虱)廄螫蠅(廄蠅)虻屬種類(馬蠅)代表性的非食血性內(nèi)寄生物包括
古柏線蟲屬種類結(jié)節(jié)線蟲屬種類(小結(jié)節(jié)蠕蟲)毛首線蟲屬夏氏線蟲屬(大腸蠕蟲)毛園線蟲屬種類擴(kuò)張蒙尼茨絳蟲(帶蟲)窄薄細(xì)頸線蟲生活在糞便中的寄生物典型地是下列昆蟲的卵和幼蟲階段家蠅(家蠅)秋家蠅(面蠅)血蠅屬種類(角蠅，水牛蠅等)所采用的本發(fā)明活性化合物的用量并非關(guān)鍵，依下述因素而異宿主及寄生蟲的性質(zhì)、給藥途徑、一次給藥還是多次投藥以及本專業(yè)一般人員均熟知的其它因素。對于一次性投藥，有效劑量一般為1.0-50mg/kg，優(yōu)選5-40mg/kg。若宿主持續(xù)受到寄生蟲感染，一般優(yōu)選多次投以本發(fā)明的化合物，例如在宿主遭受寄生蟲感染的整個(gè)期間內(nèi)投藥。這一過程可以是幾天或數(shù)周，或一個(gè)季度，甚或宿主的整個(gè)一生。因此常優(yōu)先考慮在一段時(shí)間內(nèi)持續(xù)釋放藥物的緩釋劑型。當(dāng)進(jìn)行多次投藥時(shí)，可投以較低的劑量本發(fā)明化合物，如0.1-10mg/kg/日。所有上述劑量乃根據(jù)式Ⅰ的母體化合物計(jì)量;若用其鹽，應(yīng)相應(yīng)地提高劑量以提供足量的母體化合物。但有一個(gè)例外，即當(dāng)這個(gè)鹽是與一種具有殺寄生蟲活性的化合物如左旋咪唑配伍使用時(shí)，可以減少式Ⅰ母體化合物的用量。
為防治食血性寄生蟲，必需使本發(fā)明的化合物進(jìn)入并擴(kuò)散到宿主的循環(huán)系統(tǒng)中?？梢酝ㄟ^許多投藥方式做到這一點(diǎn)。例如肌肉內(nèi)的，瘤胃內(nèi)的，靜脈內(nèi)的，口服的，皮下的和經(jīng)皮給藥。如果是口服或瘤胃內(nèi)給藥，可以保護(hù)化合物安全通過瘤胃。做到這一點(diǎn)的方法是眾所周知的。
為防治非食血性的腸道寄生蟲和抑制糞便中的寄生蟲，必需將本發(fā)明的化合物投入胃腸道中，最方便的途徑是口服或瘤胃內(nèi)給藥。
對于某些投藥劑型，例如膠囊，可用純凈的本發(fā)明中的化合物。但對大多數(shù)投藥方法而言，這些化合物則以一種或幾種生理學(xué)上可采用的載體調(diào)配。醫(yī)學(xué)和獸醫(yī)學(xué)實(shí)踐中都熟知這些調(diào)配技術(shù)，而且這一領(lǐng)域內(nèi)一般的技術(shù)人員都能很容易地對本發(fā)明進(jìn)行選擇。若以口服方式投藥，可將本發(fā)明的化合物處方為固體形式，如片劑(包括嚼片)，膠囊和膏劑，或處方為液體形式，如糖漿，水懸液，溶液，浸液等等。這些化合物也可被處方為丸劑。經(jīng)相應(yīng)的設(shè)計(jì)和處方，藥丸將滯留在反芻動(dòng)物的瘤胃中，并且在一段時(shí)間內(nèi)持續(xù)不斷地釋放出本發(fā)明的化合物。
通過飼料，飲用水或鹽塊可將本發(fā)明的化合物很方便地投給家禽家畜。若通過飼料給藥，典型地是將該化合物配成預(yù)混物，然后加到其它飼料成分中形成最終的飼料。這些化合物也可被處方在飲用水中。
這些化合物也可經(jīng)胃瘤內(nèi)、肌肉內(nèi)、靜脈內(nèi)或皮下注射給藥。典型的做法是將該化合物處方在親脂性載體中，如動(dòng)物油或植物油。提供延遲給藥的胃腸道外投藥方式也可用于本發(fā)明化合物的投藥。
所有前述配方中，該化合物均與適于特定劑型投藥的生理學(xué)上可采用的載體相混合。本發(fā)明的化合物的濃度并不嚴(yán)格，且隨投藥的特定形式而異。因此濃度范圍可為0.1-95%(w/v);許多情況下為1-50%(w/v)。
在防治寄生蟲時(shí)常聯(lián)合用藥，以降低產(chǎn)生抗性的可能，擴(kuò)大殺蟲譜和減少副作用的危害。因此本發(fā)明的化合物可與一種或多種已知的驅(qū)腸蟲劑(殺內(nèi)外寄生蟲藥)或與一種或多種已知的殺外寄生蟲藥聯(lián)用。優(yōu)選的組合是與驅(qū)腸蟲劑聯(lián)用。可與本發(fā)明的化合物聯(lián)用的有代表性的已知?dú)⒓纳x藥包括下列種種驅(qū)腸蟲劑丙硫咪唑丁萘脒蠅毒磷敵敵畏epsiprantel苯硫氨酯苯硫噠唑氟苯噠唑異阿凡曼菌素左旋咪唑甲苯咪唑米爾倍霉素噻烯氫嘧啶甲肟啶netobimin氯硝柳胺硝異硫氰二苯醚磺唑氨酯氧苯噠唑哌嗪吡喹酮噻嘧啶立克苯噠唑四咪唑噻苯咪唑殺吸蟲劑clorsulon氯氰碘柳胺雙醋氨苯氧乙醚碘硝酚腈羥氯柳苯胺氯苯碘柳胺三氯苯咪唑殺外寄生蟲藥順式氯氰菊酯雙甲脒蠅毒磷環(huán)丙菊酯氟氯氰菊醋三氟氯氰菊酯氯氰菊酯cyromazine溴氰菊酯二嗪磷除蟲脲二噁硫磷倍硫磷氰戊菊酯氟氰戊菊酯氟菊酯異阿凡曼菌素甲氧保幼素?cái)嘲傧x甲肟啶二氯苯醚菊酯亞胺硫磷嘧啶磷巴胺磷殘殺威魚滕酮雙硫磷殺蟲畏本發(fā)明以下述實(shí)施例予以說明。
將化合物調(diào)配成適于用動(dòng)物進(jìn)行評(píng)價(jià)的形式。最典型的調(diào)配只是將化合物溶解在聚乙二醇200(以下用PEG200表示)中。許多試驗(yàn)中用到了其它配方;在這些其它配方中，大多數(shù)情況下是將化合物溶解在N-甲基-2-吡咯烷酮中，或溶解在乙酸乙酯中，然后再用精制麻油擴(kuò)展。通常再加斯班-80(一種ICI美國公司出售的脫水山梨醇-油酸非離子表面活性劑)。按下列配方進(jìn)行了配制。
配方A和B1，5-雙(4-(三氟甲基)苯基)-452.4mg3-甲
腈N-甲基-2-吡咯烷酮2.25ml精制麻油6.75ml1，5-雙(4-(三氟甲基)苯基)-351.7mg3-甲
腈N-甲基-2-吡咯烷酮11.75ml精制麻油4.20ml斯班-801.05ml這兩個(gè)配方中各含50mg/ml(5%w/v)化合物。做下面的試驗(yàn)5用到這兩個(gè)配方及載體空白對照。載體空白對照由配方A的載體構(gòu)成，即只有N-甲基-2-吡咯烷酮和精制麻油。
配方C，D和E1，5-雙(4-三氟甲基)苯基)-4204.3mg3-甲
腈N-甲基-2-吡咯烷酮21.0ml精制麻油21.0ml1，5-雙(4-(三氟甲基)苯基)-3996.4mg3-甲
腈N-甲基-2-吡咯烷酮20.0ml精制麻油16.0ml斯班-804.0ml1，5-雙(4-(三氟甲基)苯基)-4204.6mg3-甲
腈N-甲基-2-吡咯烷酮21.0ml
這三個(gè)配方中化合物的濃度分別為100mg/ml，100mg/ml和200mg/ml(10%，10%和20%，均為w/v)。也制備了與這三個(gè)配方相應(yīng)的載體空白對照。所有這三個(gè)配方和空白對照均用來做下面的試驗(yàn)14。
配方F1，5-雙(4-(三氟甲基)苯基)-4500.0mg3-甲
腈N-甲基-2-吡咯烷酮22.5ml精制麻油18.0ml斯班-804.5ml化合物濃度為100mg/ml(10%w/v)。也制備了載體空白。這個(gè)配方及載體空白用來做下面的試驗(yàn)9和試驗(yàn)15。
配方G1，5-雙(4-(三氟甲基)苯基)-3-甲7994.4mg
腈四-正-丁基銨鹽N-甲基-2-吡咯烷酮40.0ml精制麻油32.0ml斯班-808.0ml這個(gè)配方含有100mg/ml(10%w/v)指定的鹽。該配方和載體對照被用于做下面的試驗(yàn)10和試驗(yàn)16。
配方H1，5-雙(4-(三氟甲基)苯基)-8045.5mg3-甲
腈N-甲基-2-吡咯烷酮40.0ml精制麻油32.0ml斯班-808.0ml
該配方提供100mg化合物/ml(10%w/v)。該配方與載體空白對照被用來做下面的試驗(yàn)12。
配方I，J和K1，5-雙(4-(三氟甲基)苯基)-3-甲
腈的鹽按下述處方四甲基銨鹽4511.2mg乙酸乙酯22.5ml精制麻油31.5ml斯班-804.5ml四-正-丙基銨鹽4996.4mg乙酸乙酯50.0ml精制麻油32.5ml斯班-805.0ml三甲基十八烷基銨鹽6004.1mg乙酸乙酯30.0ml精制麻油39.0ml斯班-806.0ml這三個(gè)配方中的鹽濃度分別為76.9mg/ml(7.69%w/v)，57.14mg/ml(5.714%w/v)和80mg/ml(8%w/v)。制備了相同組分的備份物。所有這三個(gè)配方及相關(guān)的載體空白被用來做下面的試驗(yàn)6，8和17。
配方L，M和N調(diào)配了1，5-雙(4-(三氟甲基)苯基)-3-甲
腈的另外3種鹽以進(jìn)行評(píng)價(jià)，配方如下
四-正-丁基銨鹽8200.0mg乙酸乙酯82.0ml精制麻油53.3ml斯班-808.2ml四乙基銨鹽6700.0mg乙酸乙酯95.75ml精制麻油43.55ml斯班-806.70ml四-正-戊基銨鹽8900.0mg乙酸乙酯89.0ml精制麻油57.85ml斯班-808.9ml這些配方中各自的鹽濃度分別為57.14mg/ml(5.714%w/v)，45.89mg/ml(4.589%w/v)和57.14mg/ml(5.714%w/v)。這三個(gè)配方與一個(gè)載體空白對照被用來做下面的試驗(yàn)7和22。
配方O1，5-雙(4-(三氟甲基)苯基)-3-30，000.00mg甲
腈三甲基十八烷基銨鹽乙酸乙酯150.0ml精制麻油195.0ml斯班-8030.0ml該配方中的一部分(含有80mg/ml(8%w/v)活性成分)和載體對照被用來做下面的試驗(yàn)26和27。其余部分與配方P，用來做試驗(yàn)23。
配方P1，5-雙(4-(三氟甲基)苯基)-3-6000.0mg甲
腈三甲基十八烷基銨鹽乙酸乙酯30.0ml精制麻油39.0ml斯班-806.0ml
該配方含80mg/ml鹽(8%w/v)。它與載體空白被用來做下面的試驗(yàn)23。
配方Q1，5-雙(4-(三氟甲基)苯基)-3-70，000.00mg甲
腈三甲基十八烷基銨鹽乙酸乙酯350.0ml精制麻油455.0ml斯班-8070.0ml該配方含80mg/ml(8%w/v);它與一載體空白被用于試驗(yàn)29中。
配方R1，5-雙(4-(三氟甲基)苯基)-3-50，000.00mg甲
腈三甲基十八烷基銨鹽乙酸乙酯250.0ml精制麻油325.0ml斯班-8050.0ml該配方含80mg/ml(8%w/v);它與一載體空白被用于試驗(yàn)13和30中。
配方S用下列成分按標(biāo)準(zhǔn)方法制備了一種濃乳劑以提供一種含100mg/ml(10%w/v)活性成分的濃縮物。該配方與一載體空白被用于試驗(yàn)24中。
1，5-雙(4-(三氟甲基)苯基)-3-8500.0mg甲
腈三甲基十八烷基銨鹽乙酸乙酯42.5mlDrakeol6VR(賓夕法尼亞Refining34.0ml公司出售的一種輕礦物油)Montanide888(法國巴黎Seppic公司出售的8.5ml一種二縮甘露醇油酸酯輔料)配方T用下列成分制備了另一種濃乳劑以提供一1，5-雙(4-(三氟甲基)苯基)-3-13，000.0mg甲
腈三甲基十八烷基銨鹽乙酸乙酯65.0mlDrakeol6VR52.0mlMontanide88813.0ml種有效成分濃度為100mg/ml(10%w/v)的濃縮物。該配方與一載體空白被用于試驗(yàn)25中。
配方U按下列處方配制以提供一種有效成分濃度為80mg/ml(8%w/v)的濃縮物。該配方與一載體空白被用于試驗(yàn)28中。
1，5-雙(4-(三氟甲基)苯基)-3-6000.0mg甲
腈三甲基十八烷基銨鹽乙酸乙酯30.0ml精制麻油39.0ml斯班-806.0ml
配方V用下列成分以標(biāo)準(zhǔn)方法配制了一種水懸劑1，5-雙(4-(三氟甲基)苯基)-34.00g-甲
腈三甲基十八烷基銨鹽丙二醇5.00gTergitol+TMN-6(聯(lián)合碳化物公2.00g司出售的一種乙氧三甲基壬醇非離子表面活性劑)2%黃原膠液5.00gPolyfonH(Westvaco公司出售的一0.25g種木素磺酸鈉)純水33.65g防沫劑A(DowCorning出售的一種0.10g二甲基聚硅氧烷)50.00g配方W為用犬進(jìn)行評(píng)價(jià)，制備了膠囊。用了1，5-雙(4-(三氟甲基)苯基)-3-甲
腈的兩種鹽，即四甲基銨鹽和三甲基十八烷基銨鹽。用Troust實(shí)驗(yàn)室氣流碾碎機(jī)將這兩種鹽分別碾碎成約10-20μ的中等大小的顆粒，然后裝入＃0明膠囊中。每粒膠囊中裝150mg四甲基銨鹽，每粒膠囊中裝225mg三甲基十八烷基銨鹽。用同樣大小的膠囊每粒內(nèi)裝225mg蔗糖做成安慰劑。
防治伏蠅(花蠅)和廄螫蠅(廄蠅)的試驗(yàn)以初步試驗(yàn)評(píng)價(jià)了本發(fā)明中所用的各種化合物防治廄螫蠅(廄蠅)幼蟲的效果。該初步試驗(yàn)使用了代表化合物的儲(chǔ)液。這種初步試驗(yàn)也用來作為下面所報(bào)道的體內(nèi)試驗(yàn)的附屬試驗(yàn)。在這種情況下，該試驗(yàn)用處理動(dòng)物的血清(某些情況下用全血)。初步試驗(yàn)只用來觀察對廄螫蠅(廄蠅)的防治效果;用血清或全血做的試驗(yàn)則用來觀察防治廄螫蠅和伏蠅(花蠅)的效果。試驗(yàn)方法如下。
將待評(píng)價(jià)的化合物溶解在1份丙酮/1份乙醇中，制成該化合物的5，000ppm儲(chǔ)液。將該儲(chǔ)液在近程聲電定位器中搖蕩15分鐘。將儲(chǔ)液加到15ml的試管中，再加入牛血清制成所需化合物稀釋液。在另一些試管中加入血清或全血。每支試管中放一牙科拭子，并使拭子蘸飽試管中的血清。
做防治花蠅的試驗(yàn)時(shí)，取約20頭花蠅幼蟲置于蘸飽了血清的牙科拭子頂部中央，用棉花塞住試管口，在27℃和70%R.H.下培養(yǎng)24和48小時(shí)。然后統(tǒng)計(jì)幼蟲的死亡率，并以對照死亡率進(jìn)行校正，以確定對花蠅的百分防治率。
防治廄蠅幼蟲的試驗(yàn)是將蘸飽血清的拭子放在培養(yǎng)皿中的一塊濾紙上，在皿底的中央放10頭冷凍麻醉的飽餓的廄蠅。將培養(yǎng)皿蓋好，于27℃60%R.H.培養(yǎng)48小時(shí)。在24小時(shí)和48小時(shí)各統(tǒng)計(jì)一次死亡率，并以對照死亡率進(jìn)行校正以確定對廄蠅的百分防治率。
下表給出用儲(chǔ)液和未處理的牛血清所做的防治廄蠅的試驗(yàn)結(jié)果。用經(jīng)過處理的牛的血清或全血所做的試驗(yàn)則報(bào)道如下。
對廄蠅成蟲的百分防治率濃度2448試驗(yàn)化合物(ppm)小時(shí)小時(shí)1,5-雙(4-溴苯基)-310060100-甲
腈 50 90 10025NT1001050902540NT104010050802.50401.2530401,5-雙(3,4-二氯苯基)100100100-3-甲
腈 100 100 1005080100254070104060251090102050510102.510101,5-雙(3,4-二氯苯基)-1001001003-甲
腈鈉鹽 100 100 100509010025801001080100NT=未做試驗(yàn)四-正-丁基銨鹽8200.0mg乙酸乙酯82.0ml精制麻油53.3ml斯班-808.2ml四乙基銨鹽6700.0mg乙酸乙酯95.75ml精制麻油43.55ml斯班-806.70ml四-正-戊基銨鹽8900.0mg乙酸乙酯89.0ml精制麻油57.85ml斯班-808.9ml這些配方中各自的鹽濃度分別為57.14mg/ml(5.714%w/v)，45.89mg/ml(4.589%w/v)和57.14mg/ml(5.714%w/v)。這三個(gè)配方與一個(gè)載體空白對照被用來做下面的試驗(yàn)7和22。
配方O1，5-雙(4-(三氟甲基)苯基)-3-30，000.00mg甲
腈三甲基十八烷基銨鹽乙酸乙酯150.0ml精制麻油195.0ml斯班-8030.0ml該配方中的一部分(含有80mg/ml(8%w/v)活性成分)和載體對照被用來做下面的試驗(yàn)26和27。其余部分與配方P，用來做試驗(yàn)23。
配方P1，5-雙(4-(三氟甲基)苯基)-3-6000.0mg甲
腈三甲基十八烷基銨鹽乙酸乙酯30.0ml精制麻油39.0ml斯班-806.0ml
反應(yīng)最初產(chǎn)生一種腙類中間體
可在優(yōu)選pH4-6將此中間體分離出來。但若欲得到對稱化合物，每2摩爾的重氮鹽，使用1摩爾活潑的亞甲基化合物可得到最終產(chǎn)物，并可在pH4-12的條件下將其直接分離。若欲得到非對稱化合物，則用等摩爾量的第一種重氮鹽和活潑亞甲基化合物反應(yīng)，生成的腙類中間體(可分離亦可不分離)再與另一種不同的重氮鹽反應(yīng)。
用標(biāo)準(zhǔn)的方法制備鹽。典型的情況是甲
與一種金屬或氫氧化銨反應(yīng)，或者是鹽與已知的堿性殺寄生蟲化合物的情況下，甲
與特定的化合物反應(yīng)-不論哪種情況，反應(yīng)均在適宜的溶劑中進(jìn)行。
本發(fā)明的季胺鹽是新的
1,5-雙(4-(三氟甲基)苯基)-3100100100-甲
腈三甲基十八烷基銨鹽 50 100 10025801001040100109010058010028090150900.5405025100NT1080NT540NT2.510NT10NT25100NT10100NT550NT2.510NT10NT1,5-雙(4-(三氟甲氧基)苯基)-3100100100-甲
腈 100 100 1005090100251001001070100251001001080100560902.52060NT=未做實(shí)驗(yàn)
1,5-雙(4-(三氟甲氧基)苯基)-31070100-甲
腈(續(xù)) 5 20 1002207010400.520301,5-雙(4-(三氟甲氧基)苯基)-3100100100-甲
腈鈉鹽 25 90 1001070100520902.52080107010055010023070110100.520201,5-雙(4-(三氟甲硫基)苯基)-3100100100-甲
腈 50 100 10025100100108010057010010801005601002.5401001.253070108010057010024090130700.53040
1-(4-(三氟甲基)苯基)-5-(4-100100100(三氟甲基磺酰氧基)苯基-3-)-3-50100100甲
腈 25 100 1001010010010901005501002.550801.250400.6250201001001001,5-雙(4-(三氟甲基磺酰氧基)苯50100100基)-3-甲
腈 25 100 10010901005701002.520201.2510200.625101050100100206010010209050101070100510702.510301.250200.6250101,5-雙(4-(1,100801001,2,2-四氟乙氧基)苯基)-3-甲
腈 100 90 100507010025501001050100
防治綿羊中捻轉(zhuǎn)血矛線蟲的試驗(yàn)(試驗(yàn)1-10，表1-10)用被線蟲感染的綿羊來評(píng)價(jià)本發(fā)明中所用的有代表性的化合物。這些綿羊系自然地感染了捻轉(zhuǎn)血矛線蟲，且常常同時(shí)感染有其它種線蟲，多數(shù)情況下是蛇形毛圓線蟲。評(píng)價(jià)按下述方式實(shí)施。在許多試驗(yàn)中，代表性化合物的配制只是簡單地將其溶解在聚乙二醇200(“PEG200”)中。一般是以一次性瘤胃內(nèi)注入的方式將每一種配制好的化合物投給綿羊。典型的情況是，每一處理組為2只綿羊，載體對照組為1只綿羊。每天在投藥處理前和處理后各收集一次羊的糞便，計(jì)數(shù)每克糞便中的蟲卵數(shù)。對于那些每克糞便中蟲卵數(shù)的降低率大于75%的羊，則計(jì)數(shù)總的蟲體排出數(shù)，并將該羊剖檢，計(jì)數(shù)消化道內(nèi)未排出的蟲體數(shù)。
另外，在給羊投以試驗(yàn)藥物之前和投藥以后的30分鐘、5小時(shí)、24小時(shí)以及每天一次直到投藥后的第七天，從羊采集血樣。用上述方法在體外評(píng)價(jià)這些血樣防治黑花蠅和廄螫蠅的效果。
這些評(píng)價(jià)的結(jié)果開列如下。注意到與一般方法和差別。所有各表中“VC”表示載體對照。在所有的試驗(yàn)中綿羊均未表現(xiàn)有不良反應(yīng)。
防治綿羊肝片吸蟲的試驗(yàn)(試驗(yàn)11-13和表11-13)評(píng)價(jià)了本發(fā)明在防治綿羊肝片吸蟲(肝吸蟲)上的效果。取12個(gè)月大的綿羊若干只，給每只羊一次性瘤胃內(nèi)注入100個(gè)肝片吸蟲的后囊蚴使之獲得實(shí)驗(yàn)感染。將這些羊分成治療組和對照組，每組二、三只羊，給治療組的羊在感染后的3天、3周和12周各以一次性瘤胃內(nèi)注入的方式投以一次試驗(yàn)化合物，對照組的羊則在第12周一次性瘤胃內(nèi)注入載體液。
投藥前以及投藥以后的第2周和第12周各連續(xù)采集5次血樣(每天一次)。按前述方法分析這些血樣的抗黑花蠅和抗廄螫蠅的活性。在吸蟲感染后的第14周將所有羊只實(shí)施安樂死并計(jì)數(shù)總的蟲數(shù)。
這些試驗(yàn)的結(jié)果列于下面的表中。

做了第二套試驗(yàn)。所用方法與前述相同，但下面這個(gè)試驗(yàn)除外用配方H，僅在吸蟲感染后的7天和3周各投一次藥，第10周將羊處死并計(jì)數(shù)總蟲數(shù)。結(jié)果列于下面表中。

做了第三套試驗(yàn)。所用方法同前，但下面這個(gè)試驗(yàn)除外用配方R;在吸蟲感染后的7天、3周和10周各投一次藥。試驗(yàn)結(jié)果如下列各表所列。
在牛中做的試驗(yàn)(試驗(yàn)14-25，表14-25)用平均體重約300kg的牛做了一系列藥效評(píng)價(jià)試驗(yàn)。試驗(yàn)14-19中沒有腸道蠕蟲感染。通過頸靜脈多次采集血樣，典型的采血時(shí)間為投藥前，投藥后的30分鐘，5小時(shí)和24小時(shí)，以及投藥后每天采一次直到第12天。用上述方法評(píng)價(jià)這些血樣的殺黑花蠅和廄螫蠅的效果。
在試驗(yàn)20-25中，投藥及采血和上述的相同，但牛感染了奧氏胃線蟲，因此還另外評(píng)價(jià)了所用的化合物在防治牛的這種線蟲的效果。這種評(píng)價(jià)是通過計(jì)數(shù)投藥前和投藥后每天的每克牛糞便中的蟲卵數(shù)完成的。凡每克糞便中蟲卵數(shù)的減少率高于75%的牛則被處死，剖檢計(jì)數(shù)總蟲數(shù)，并與未處理的對照相比較。
結(jié)果列于下面各表中。

試驗(yàn)26和試驗(yàn)27防治面蠅(秋家蠅)、角蠅(西方角蠅)和廄蠅(廄螫蠅)的試驗(yàn)以小母牛評(píng)價(jià)了1，5-雙(4-(三氟甲基)苯基)-3-甲
腈的三甲基十八烷基銨鹽防治下列害蟲上的藥效面蠅(秋家蠅，Muscaautumnalis)角蠅(西方角蠅，Haematobiairritans)廄蠅(廄螫蠅，Stomoxyscalciterans)用同一批小母牛做了兩個(gè)試驗(yàn)，每組兩頭小牛，共四組。第一個(gè)試驗(yàn)中，三組的投藥劑量分別為9，13.5和18mg/kg，第四組只投以作為載體的溶劑。在第二個(gè)試驗(yàn)中，兩組的投藥劑量分別為27.0和36.0mg/kg，其余兩組不投藥而只投以載體溶劑(對照)。用的是配方O。投藥方法為瘤胃內(nèi)注入法。
在這兩個(gè)試驗(yàn)中用各種方法來檢測化合物的效力。收集糞便并進(jìn)行生測以檢驗(yàn)其抗1齡面蠅和角蠅幼蟲的能力。將角蠅和廄蠅引入小牛并觀察反應(yīng)。最后采了血樣并對血和血清做生測以檢測其抗廄蠅的活性。
觀察到的結(jié)果如下。投藥處理后的第1天和第2天從糞便中采集到的面蠅和角蠅，其成蟲的羽化被完全阻抑。投藥劑量為27mg/kg的組，小牛身上吸血角蠅數(shù)量減少了，但廄蠅的數(shù)量未受影響。血和血清的生測結(jié)果表明它們確有抗廄蠅的活性，特別在高劑量組更是如此。
試驗(yàn)28抗綿羊肺絲蟲(絲網(wǎng)尾線蟲)的試驗(yàn)評(píng)價(jià)了1，5-雙(4-(三氟甲基)苯基)-3-甲
腈的三甲基十八烷基銨鹽在防治綿羊的肺絲蟲(絲網(wǎng)尾線蟲)的藥效。將化合物(配方U)以瘤胃內(nèi)注入法投給事先已接種了肺絲蟲幼蟲的綿羊。所用劑量分別為8，18和36mg/kg。第四組羊僅投給載體溶劑。投藥后連續(xù)收集糞樣7-9天，然后將羊處死并計(jì)數(shù)羊體內(nèi)的總蟲數(shù)。
結(jié)果表明該化合物有抗肺絲蟲的活性。剖檢后的結(jié)果表明三個(gè)劑量組的蟲數(shù)分別減少了5.3%，59.8%和61.2%。糞便中肺絲蟲幼蟲數(shù)在18和36mg/kg組中也減少了。
試驗(yàn)29抗角蠅(西方角蠅)和廄蠅(廄螫蠅)的試驗(yàn)評(píng)價(jià)了1，5-雙(4-(三氟甲基)苯基)-3-甲
腈的三甲基十八烷基銨鹽在菜牛身上防治角蠅(西方角蠅)和廄蠅(廄螫蠅)的藥效。用了8頭牛，每組2頭。投藥劑理分別為18，27和36mg/kg化合物及載體溶劑對照。所用配方為配方Q。評(píng)價(jià)對角蠅的作用是將角蠅釋放到牛身上而后觀察死亡率。評(píng)價(jià)對廄蠅的作用是讓養(yǎng)在籠內(nèi)的廄蠅定期地吸食試驗(yàn)牛的血。也收集了糞樣以分析化合物對角蠅的影響。
吸了牛血的角蠅在第1天受到明顯的影響。投以化合物18，27和36mg/kg分別使死亡率達(dá)到72，95和86%。在第2-5天，所有投藥組的角蠅存活數(shù)都低于對照組。投藥處理對僅吸過一次受藥動(dòng)物血的廄蠅幾乎無效。吸過四次受藥動(dòng)物血(包括所有三個(gè)劑量)的廄蠅的死亡率，從統(tǒng)計(jì)學(xué)角度講明顯高于只吸過一次或兩次血的廄蠅的死亡率。所有投藥組的牛，在投藥后第二天收集的糞便中沒有角蠅的幼蟲出現(xiàn)。投藥后第三天，劑量為27和36mg/kg組的牛的糞便中也沒有角蠅出現(xiàn)。這項(xiàng)研究說明，給牛瘤胃內(nèi)注入這種化合物會(huì)將該藥物(或其代謝物)在受藥動(dòng)物體內(nèi)的全身轉(zhuǎn)移。
試驗(yàn)30和試驗(yàn)31在綿羊體內(nèi)防治捻轉(zhuǎn)血矛線蟲Atwood株(異阿凡曼菌素抗性株)的試驗(yàn)在第一個(gè)試驗(yàn)中，評(píng)價(jià)了1，5-雙(4-(三氟甲基)苯基)-3-甲
腈的三甲基十八烷基銨鹽(化合物13)防治小羊的捻轉(zhuǎn)血矛線蟲Atwood株(異阿凡曼菌素抗性株)的效力。2個(gè)小羊?yàn)橐唤M，共三組。給一組投以該化合物(配方R)36mg/kg;第二組只投以相應(yīng)的載體;第三組投以異阿凡曼菌素0.2mg/kg?；衔锖洼d體都是一次性瘤胃注入，異阿凡曼菌素則通過口服給藥。
投藥處理后將小羊喂養(yǎng)7天，然后處死，將皺胃取出，計(jì)蟲數(shù)。收集羊糞做蟲卵計(jì)數(shù)。試驗(yàn)結(jié)果列于下表中。
表26A感染了捻轉(zhuǎn)血矛線蟲(Atwood株)的小羊糞便中的蟲卵計(jì)數(shù)和皺胃中的蟲計(jì)數(shù)(蟲卵數(shù)/克)每克糞便中蟲卵數(shù)血矛線蟲毛圓線蟲處理0投藥后3天投藥后7天♂♀♂♀載體對照24502900180066050013804200410040504336004073異阿凡曼菌素1550315035006476330077504250460073383300化合物133750000013533350000000做了一項(xiàng)補(bǔ)充試驗(yàn)。每個(gè)處理組用5只小羊，并用了對異凡曼菌素敏感的和有抗性的不同株的捻轉(zhuǎn)血矛線蟲。用異阿凡曼菌素作為參照藥物?；衔?3經(jīng)瘤胃內(nèi)注入;異阿凡曼菌素則按照產(chǎn)品說明使用。結(jié)果列于下表。
試驗(yàn)32在牛體內(nèi)的抗蜱試驗(yàn)評(píng)價(jià)了1，5-雙(4-(三氟甲基)苯基)-3-甲
腈在單獨(dú)使用及與磺唑氨酯合用于牛時(shí)的防治蜱(斑點(diǎn)鈍眼蜱和變異革蜱)的效果。劑量為18或36mg/kg。瘤胃內(nèi)注入給藥，用配方R;磺唑氨酯單獨(dú)給藥(瘤胃內(nèi)注入)。用8頭體重180-222kg的小母牛，分作四組。在投藥前2天、投藥當(dāng)天以及投藥后的1、2、4天，使每頭牛給未吸血的上述兩種蜱喂血。蜱養(yǎng)在小盒子里，喂血時(shí)將小盒子附著在牛體上。
投藥前采集血樣，其后每天采一次血樣。按上述測試對花蠅幼蟲和廄蠅成蟲的培皿法分析血樣。一般說來，所有各種劑量的1，5-雙(4-(三氟甲基)苯基)-3-甲
腈在投藥后48小時(shí)采的血樣，在培皿中與試蟲接觸48小時(shí)，都表現(xiàn)有殺蟲活性。高劑量組(36mg/kg)表現(xiàn)有3天的活性。從合用1，5-雙(4-(三氟甲基)苯基)-3-甲
腈和磺唑氨酯的牛采的血樣，在這種生測中所表現(xiàn)的殺蟲活可延長到投藥后的第5天。也觀察了這些牛對蜱的影響。35天的觀察結(jié)果表明，對蜱也有一定的防治作用，如下表所示。
表27飽血蜱和產(chǎn)卵蜱的百分比表27A在感染了美洲鈍眼蜱的小牛身上所表現(xiàn)的活性采到蜱的飽飽血蜱的處理采到的蜱數(shù)飽血蜱數(shù)產(chǎn)卵蜱數(shù)血率(%)產(chǎn)卵率(%)VC3017165788化合物1331142451418mg/kg化合物1326144542936mg/kg化合物132942145036mg/kg+磺唑氨酯10mg/kg表27B:在感染了變異革蜱的小牛身上所表現(xiàn)的活性采到蜱的飽飽血蜱的處理采到的蜱數(shù)飽血蜱數(shù)產(chǎn)卵蜱數(shù)血率(%)產(chǎn)卵率(%)VC3222106945化合物13363416944718mg/kg化合物13372911783836mg/kg化合物1333216642936mg/kg+磺唑氨酯10mg/kg
試驗(yàn)33防治牛的普通疥螨的試驗(yàn)評(píng)價(jià)了1，5-雙(4-(三氟甲基)苯基)-3-甲
腈(化合物13)在單用及與磺唑氨酯合用防治牛的普通疥螨(羊癢螨)的效果。將12頭體重為179-239kg的小牛分作四組。瘤胃內(nèi)注入給藥，劑量為18和36mg/kg;磺唑氨酯單獨(dú)經(jīng)瘤胃內(nèi)注入法給藥，劑量10mg/kg。
使牛染螨的方法是把從染螨牛身上刮下來的毛和表皮碎屑“接種”到試驗(yàn)牛的肩隆區(qū)。為說明藥效，刮出兩塊各為1平方英吋的區(qū)域，用刮下的毛和表皮中的螨數(shù)評(píng)估藥效。螨計(jì)數(shù)結(jié)果列于下表。
試驗(yàn)34防治狗的蚤和蜱的試驗(yàn)評(píng)價(jià)了1，5-雙(4-(三氟甲基)苯基)-3-甲
腈的四甲基銨鹽(化合物8)和三甲基十八烷基銨鹽(化合物13)在防治比格狗的跳蚤(貓櫛首蚤)和蜱(血紅扇頭蜱)上的效果。將12只體重平均為11.8kg且染蚤的狗分作四個(gè)處理組，一組作對照，二組投以化合物8(24mg/kg)，三組投以化合物13(36mg/kg)，四組投以化合物13(36mg/kg)加上磺唑氨酯(10mg/kg)。載體對照及化合物8和13以口服膠囊方式(配方W)給藥，磺唑氨酯則以液體管飼法給藥。在第5天做了蚤的重復(fù)感染，第3天和第6天做了蜱的重復(fù)感染。每組的蚤數(shù)和蜱數(shù)大致相等。從兩方面估價(jià)蚤和蜱的防治率同一處理組中參照開始時(shí)的種群數(shù)量進(jìn)行評(píng)估，服藥的各組參照同一天對照組的種群數(shù)量進(jìn)行評(píng)估。
結(jié)果列于下面的表中。
表29A抗蚤活性蚤數(shù)處理劑量mg/kg0天1天3天6天8天VC086797591.778.7與第0天相比的減少率(%)-8.112.7-6.68.4化合物8249011.3249.329.3與第0天相比的減少率(%)-87.497.745.267.4與對照相比的減少率(%)-85.797.346.262.8化合物133691.717033.320.3與第0天相比的減少率(%)-81.510063.777.8與對照相比的減少率(%)-80.210063.774.2化合物13/36/1085.3-018.38.3磺唑氨酯與第0天相比的減少率(%)-10010078.590.3與對照相比的減少率(%)-1001008089.5
表29B:抗蜱活性蜱數(shù)處理劑量mg/kg0天1天3天6天8天VC013.713.713.32120與第0天相比的減少率(%)-02.9-53-45化合物82418421413與第0天相比的減少率(%)-77.788.822.227.7與對照相比的減少率(%)-70.88533.335化合物1336178.341713.6與第0天相比的減少率(%)-51.195.6020與對照相比的減少率(%)-39.469.91932化合物13/36/10132.70.6717.614.3磺唑氨酯與第0天相比的減少率(%)-79.294.8-35.3-10與對照相比的減少率(%)-80.394.91028.5
試驗(yàn)35防治綿羊中多種寄生物的試驗(yàn)評(píng)價(jià)了1，5-雙(4-(三氟甲基)苯基)-3-甲
腈防治綿羊的捻轉(zhuǎn)血矛線蟲、胃線蟲屬種類、蛇形毛圓線蟲和其它寄生蟲的效果。該化合物經(jīng)口服給藥，每天一次，連續(xù)6天。所用劑型為水懸液。作為對照的羊每天口服10ml水懸液(不含甲
的載體溶劑)。
絳蟲種群數(shù)量減少了50%，細(xì)頸線蟲減少了72.3%。其它寄生蟲的防治效果列于下面表中。

試驗(yàn)36防治綿羊中多種寄生物的試驗(yàn)評(píng)價(jià)了化合物6，8和13防治綿羊的多種寄生蟲的藥效。這些寄生蟲包括捻轉(zhuǎn)血矛線蟲，蛇形毛圓線蟲，胃線蟲屬種類和蒙尼絳蟲。每個(gè)處理組4只羊。投藥方式為經(jīng)口管飼法投以相應(yīng)化合物的水懸液。劑量相當(dāng)于母體化合物(化合物6)5mg/kg體重。試驗(yàn)持續(xù)10天，然后將羊處死，剖檢消化道內(nèi)的蟲數(shù)。
以每克糞便中的蟲卵數(shù)、血清培皿接觸法分析以及剖檢時(shí)皺胃和小腸中的蟲計(jì)數(shù)來確定藥效。結(jié)果列于下列各表中。
此外，觀察到了殺絳蟲的活性。在投藥化合物6和化合物8的試驗(yàn)組的每一組中有2只羊體內(nèi)絳蟲被全部清除;在服用化合物13的組中，兩只染蟲羊中的一只羊的體內(nèi)絳蟲被全部清除，另一只羊的體內(nèi)僅有11條未成熟的絳蟲。
權(quán)利要求
1.下式Ⅰ化合物或其生理上可以接受的鹽用于制備一種藥物，該藥物用于防治脊椎動(dòng)物的吸血性寄生蟲或非吸血性內(nèi)寄生蟲，式Ⅰ為
其中每個(gè)R各自代表下式殘基
其中R1為氰基；R2為硝基；R3為溴，氯或氟；R4為碘或式-R5nR6基團(tuán)，其中n代表0或1，R5代表-O-，-S-，-SO-，-SO2，或-OSO2-，和R6代表-CF3，-CF2CF2H，-CH2CF3，或-C2F5；并具有下述限定條件(1)至少一個(gè)R帶有至少一個(gè)取代基，(2)當(dāng)一個(gè)R含有一個(gè)或多個(gè)R1，R2或R4取代基時(shí)，該R中取代基的總數(shù)不多于3，其特征是采用所說藥物而致使有效成分達(dá)到全身性分布。
2.按照權(quán)利要求1的用途，其中該藥物用于治療或保護(hù)脊椎動(dòng)物抵抗吸血性寄生蟲的侵害。
3.按照權(quán)利要求1或2的用途，其中式Ⅰ化合物為1，5-雙(4-(三氟甲基)苯基)-3-甲
腈或其生理學(xué)上可采用的鹽。
4.按照權(quán)利要求1，2或3的用途，以治療或保護(hù)家畜或魚。
5.抑制溫血?jiǎng)游锛S便中寄生蟲生長的方法，該方法包括給動(dòng)物投以有效量的活性藥物，該藥物為式Ⅰ化合物及其生理學(xué)上可采用的鹽
其中每個(gè)R各自代表下式殘基
其中R1為氰基;R2為硝基;R3為溴，氯或氟;R4為磺或式-R5nR6基團(tuán)，其中n代表0或1，R5代表-O-，-S-，-SO-，-SO2，或-OSO2-，和R6代表-CF3，-CF2CF2H，-CH2CF3，或-C2F5;并具有下述限定條件(1)至少一個(gè)R帶有至少一個(gè)取代基，(2)當(dāng)一個(gè)R含有一個(gè)或多個(gè)R1，R2或R4取代基時(shí)，R上的取代基總數(shù)不多于3個(gè)。
6.一種保護(hù)或治療脊椎動(dòng)物抵御寄生蟲的方法，該方法包括給動(dòng)物投以兩種活性藥物，第一種活性藥物為式Ⅰ的化合物或其生理學(xué)上可采用的鹽
其中每個(gè)R各自代表下式殘基
其中R1為氰基;R2為硝基;R3為溴、氯或氟;R4為碘或式-R5nR6基團(tuán)，其中n代表0或1，R5代表-O-，-S-，-SO-，-SO2，或-OSO2-，和R6代表-CF3，-CF2CF2H，-CH2CF3，或-C2F5;并具有下述限定條件(1)至少有一個(gè)R帶有至少一個(gè)取代基，(2)當(dāng)一個(gè)R含有一個(gè)或多個(gè)R1，R2或R4取代基時(shí)，該R所帶取代基的總數(shù)不多于3個(gè);第二種活性藥物為選自下組藥物中的一種化合物丙硫咪唑，苯硫噠唑，氟苯噠唑，甲苯咪唑，磺唑氨酯，氧苯噠唑，立克苯噠唑，噻苯咪唑，三氯苯咪唑，左旋咪唑，噻烯氫嘧啶，噻嘧啶，和哌嗪;給動(dòng)物投以所說的第一種和第二種藥劑，其用量為兩者一起有效地防治寄生蟲。
7.用于保護(hù)或治療脊椎動(dòng)物以抵御寄生蟲侵害的一種殺寄生蟲組合物，該組合物包括的第一種活性成分為式Ⅰ所代表的化合物及其生理學(xué)上可采用的鹽，
其中每個(gè)R各自代表下式殘基
其中R1為氰基;R2為硝基;R3為溴、氯或氟;R4為碘或式-R5nR6基團(tuán)，其中n代表0或1，R5代表-O-，-S-，-SO-，-SO2，或-OSO2-，和R6代表-CF3，-CF2CF2H，-CH2CF3，或-C2F5;并具有下述限定條件(1)至少有一個(gè)R帶有至少一個(gè)取代基，(2)當(dāng)一個(gè)R含有一個(gè)或多個(gè)R1、R2或R4取代基時(shí)，該R所帶取代基的總數(shù)不多于3個(gè);以及第二種活性成分，其為選自下組藥物的一種化合物丙硫咪唑，苯硫噠唑，氟苯噠唑，甲苯咪唑，磺唑氨酯，氧苯噠唑，立克苯噠唑，噻苯咪唑，三氯苯咪唑，左旋咪唑，噻烯氫嘧啶，噻嘧啶，和哌嗪;給動(dòng)物所說的第一種和第二種活性藥劑，其用量為，兩者一起能有效地防治寄生蟲。
8.下式化合物
其中每個(gè)R各自代表下式殘基
其中R1為氰基;R2為硝基;R3為溴，氯或氟;R4為碘或式-R5nR6基團(tuán)，其中n代表0或1，R5a代表-O-，-S-，-SO-，或-SO2，和R6代表-CF3，-CF2CF2H，-CH2CF3，或-C2F5;并具有下述限定條件(1)至少有一個(gè)R帶有至少一個(gè)取代基，(2)當(dāng)一個(gè)R含有一個(gè)或多個(gè)R1，R2或R4取代基時(shí)，該R所帶取代基的總數(shù)不多于3個(gè);而且每個(gè)R7各分別選自含有1-20個(gè)碳原子的烷基，所有R7基團(tuán)的碳原子總數(shù)為4-40。
9.按照權(quán)利要求8的化合物，它是1，5-雙(4-(三氟甲基)苯基)-3-甲
腈的任何鹽
10.下式化合物
其中每個(gè)R各自代表下式殘基
其中R1為氰基;R2為硝基;R3為溴、氯或氟;R4為碘或式-R5nR6基團(tuán)，其中n代表0或1，R5代表-O-，-S-，-SO-，-SO2，或-OSO2-，和R6代表-CF3，-CF2CF2H，-CH2CF3，或-C2F5;并具有下述限定條件(1)至少有一個(gè)R帶有至少一個(gè)取代基，(2)當(dāng)一個(gè)R含有一個(gè)或多個(gè)R1，R2或R4取代基時(shí)，該R所帶取代基的總數(shù)不多于3個(gè);其中X+為左旋咪唑、噻烯氫嘧啶、噻嘧啶或哌嗪的陽離子。
11.按照權(quán)利要求10的化合物，其中
是由1，5-雙(4-(三氟甲基)苯基)-3-甲
腈形成的陰離子。
12.適用于對那些對吸血性寄生蟲或非吸血性腸道寄生蟲敏感的或受其影響的家畜或魚進(jìn)行全身性防護(hù)或治療的殺寄生蟲組合物，該組合物包括作為活性成分的權(quán)利要求1限定的式Ⅰ化合物，或其具生理學(xué)活性的鹽，和一種或多種生理學(xué)上可采用的載體。
13.按照權(quán)利要求12的殺寄生蟲組合物，適于口服或瘤胃內(nèi)給藥。
全文摘要
本發(fā)明涉及使用1，5-二芳基-3-甲腈類化合物防治脊椎動(dòng)物的寄生蟲。
文檔編號(hào)A61K31/275GK1088779SQ9310001
公開日1994年7月6日 申請日期1993年1月2日 優(yōu)先權(quán)日1993年1月2日
發(fā)明者D·I·韋基澤 申請人:伊萊利利公司