專利名稱：具有抗腫瘤活性的番荔枝脂肪酸及其脂肪酸甲酯有效部位的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種植物提取物，具體是涉及一種具有抗腫瘤活性的番荔枝脂肪酸有效部位及其在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
番荔枝內(nèi)酯是一類從番荔枝科植物中提取分離得到的天然化合物，番荔枝中的番荔枝內(nèi)酯類化合物具有廣泛的生物活性，最典型的是殺蟲和抗腫瘤細(xì)胞活性，研究顯示番荔枝內(nèi)酯在體內(nèi)外具有強(qiáng)大的腫瘤細(xì)胞毒性，而且對多種腫瘤細(xì)胞都顯示較好的生物活性，研究表明番荔枝內(nèi)酯抗腫瘤活性的作用機(jī)理是通過阻斷線立體NADH氧化還原酶，從而阻止呼吸鏈電子的傳遞，抑制腫瘤細(xì)胞ATP的生成，使腫瘤細(xì)胞因饑餓而死亡，其作用機(jī)制獨(dú)特，不同于一般抗腫瘤藥物的作用機(jī)制，被喻為“明日抗癌之星”。但關(guān)于番荔枝種子中的脂肪酸目前還未報(bào)道有抗腫瘤活性。

發(fā)明內(nèi)容
發(fā)明目的:本發(fā)明的目的是在番荔枝現(xiàn)有活性成分的基礎(chǔ)之上，開發(fā)新的抗腫瘤活性部位，擴(kuò)大藥源，提供一種成分清楚，質(zhì)量可控，抗腫瘤活性強(qiáng)的番荔枝脂肪酸有效部位。技術(shù)方案:為了實(shí)現(xiàn)以上目的，本發(fā)明采取的技術(shù)方案為:
一種具有抗腫瘤活性的番荔枝的脂肪酸有效部位，其特征在于:它由下列方法制備得
到:
(1)取番荔枝種子，打粉后 用正己烷或石油醚回流提取2至3次，合并提取液，濃縮后得到提取物；
(2)取步驟(I)得到的提取物，上硅膠柱層析，采用正己烷-二氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇為洗脫劑，極性從低到高依次洗脫，得到重量含量為81%至85%的脂肪酸有效部位，其中不飽和脂肪酸的重量含量為51%至55% ；
所述的脂肪酸有效部位包括棕櫚酸、硬脂酸、油酸、亞油酸、肉豆蘧酸和亞麻酸。以上所述的具有抗腫瘤活性的番荔枝的脂肪酸有效部位，脂肪酸有效部位中含有重量含量為51%至55%的不飽和脂肪酸。本發(fā)明提供的具有抗腫瘤活性的番荔枝的脂肪酸甲酯有效部位，其由下列方法制備得到:
(1)取番荔枝種子，打粉后用正己烷或石油醚回流提取2至3次，合并提取液，濃縮后得到提取物；
(2)取步驟(I)得到的提取物，上硅膠柱層析，采用正己烷-二氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇為洗脫劑，極性從低到高依次洗脫，得到重量含量為81至85%的脂肪酸有效部位，其中不飽和脂肪酸的重量含量為51%至55% ；
(3)取步驟(2)制備得到的脂肪酸有效部位與濃度為1.0 mol/L氫氧化鈉水溶液回流提取30至60分鐘,然后用乙醚萃取,取水相,然后用濃度為1.0 mo I / L鹽酸溶液酸化，然后用乙醚萃取，取乙醚層，濃縮乙醚溶劑后用正己烷溶解，然后用體積比為2:98的硫酸:甲醇溶液回流提取I至3小時(shí)，然后用正已烷萃取，濃縮正已烷后得到重量含量為93至95%的脂肪酸甲酯有效部位；
所述的脂肪酸甲酯有效部位包括棕櫚酸甲酯，硬脂酸甲酯，油酸甲酯，亞油酸甲酯，肉豆蘧酸甲酯，亞麻酸甲酯。以上所述的具有抗腫瘤活性的番荔枝的脂肪酸甲酯有效部位，脂肪酸甲酯有效部位中含有重量含量為71%至75%的不飽和脂肪酸甲酯。作為優(yōu)選方案，以上所述的具有抗腫瘤活性的番荔枝脂肪酸有效部位，所述的洗脫劑的梯度洗脫程序?yàn)?先用正己烷和二氯甲烷體積比為100:0至O:100洗脫；然后再用二氯甲燒和乙酸乙酯體積比為，100:0至O:100 ;最后用乙酸乙酯和甲醇體積比100:0至O:100。洗脫過程中， 采用硅膠薄層色譜跟蹤，相同斑點(diǎn)洗脫部位合并。作為優(yōu)選方案，以上所述的具有抗腫瘤活性的番荔枝脂肪酸有效部位在制備防治肺癌、肝癌、宮頸癌或乳腺癌藥物中的應(yīng)用。作為優(yōu)選方案，以上所述具有抗腫瘤活性的番荔枝脂肪酸有效部位在制備防治肺癌、肝癌、宮頸癌或乳腺癌藥物中的應(yīng)用，把番荔枝脂肪酸有效部位和藥學(xué)上可接受的載體制成片劑、膠囊劑、脂肪乳劑、栓劑、微囊、滴丸、軟膏劑劑型的藥物。本發(fā)明提供的具有抗腫瘤活性的番荔枝脂肪酸有效部位制成膠囊劑時(shí)把番荔枝脂肪酸有效部位和載體乳糖或玉米淀粉混合均勻，整粒，然后裝膠囊制成膠囊劑。將本發(fā)明提供的番荔枝脂肪酸有效部位制成片劑時(shí)，把番荔枝脂肪酸有效部位和乳糖或玉米淀粉，需要時(shí)加入潤滑劑硬脂酸鎂，混合均勻，然后壓片制成片劑。本發(fā)明提供的番荔枝脂肪酸有效部位制成顆粒劑時(shí)，把番荔枝脂肪酸有效部位和稀釋劑乳糖或玉米淀粉混合均勻，整粒，干燥，制成顆粒劑。本發(fā)明提供的具有抗腫瘤活性的番荔枝脂肪酸甲酯有效部位在制備防治乳腺癌、腎癌或人黑色素癌藥物中的應(yīng)用。以上所述的具有抗腫瘤活性的番荔枝脂肪酸甲酯有效部位在制備防治乳腺癌、腎癌或人黑色素癌藥物中的應(yīng)用時(shí)，把番荔枝脂肪酸有效部位和藥學(xué)上可接受的載體制成片齊U、膠囊劑、脂肪乳劑、栓劑、微囊、滴丸、軟膏劑劑型的藥物。有益效果:本發(fā)明提供的具有抗腫瘤活性的番荔枝脂肪酸有效部位或脂肪酸甲酯有效部位與現(xiàn)有技術(shù)相比的優(yōu)點(diǎn)有:
現(xiàn)有技術(shù)中番荔枝脂肪油作為廢物扔棄，不僅浪費(fèi)資源，污染環(huán)境，本發(fā)明通過大量實(shí)驗(yàn)篩選，變廢為寶，以現(xiàn)有資源開出番荔枝種子中脂肪酸有效部位或脂肪酸甲酯有效部位的抗腫瘤新活性，為番荔枝種子中的脂肪油提供了新的臨床用途，番荔枝資源廣泛，可形成產(chǎn)業(yè)化，具有重要的社會(huì)效益和經(jīng)濟(jì)效應(yīng)。
具體實(shí)施例方式根據(jù)下述實(shí)施例，可以更好地理解本發(fā)明。然而，本領(lǐng)域的技術(shù)人員容易理解，實(shí)施例所描述的具體的物料配比、工藝條件及其結(jié)果僅用于說明本發(fā)明，而不應(yīng)當(dāng)也不會(huì)限制權(quán)利要求書中所詳細(xì)描述的本發(fā)明。
實(shí)施例1
一種具有抗腫瘤活性的番荔枝的脂肪酸有效部位，它由下列方法制備得到:
(1)取番荔枝種子lOOOg，打粉后用正己烷回流提取2次，合并提取液，濃縮后得到提取物 94g ；
(2)取步驟(I)得到的提取物94g，上硅膠柱層析，先用正己烷和二氯甲烷體積比為100:0至O:100洗脫；然后再用二氯甲烷和乙酸乙酯體積比為，100:0至O:100 ;最后用乙酸乙酯和甲醇體積比100:0至O:100。洗脫過程中，采用硅膠薄層色譜跟蹤，脂肪酸相同斑點(diǎn)洗脫部位合并，濃縮得到得到脂肪酸有效部位63 g ；
經(jīng)GC分析，所述的脂肪酸有效部位包括棕櫚酸、硬脂酸、油酸、亞油酸、肉豆蘧酸和亞麻酸。脂肪酸有效部位中含有81 %的重量百分比的脂肪酸，并且不飽和脂肪酸占脂肪酸的重量百分含量為51%。實(shí)施例2
本發(fā)明提供的具有抗腫瘤活性的番荔枝的脂肪酸甲酯有效部位，其由下列方法制備得
到:
(1)取番荔枝種子lOOOg，打粉后用正己烷回流提取3次，合并提取液，濃縮后得到提取物 94g ；
(2)取步驟(I)得到的提取物，上硅膠柱層析，先用正己烷和二氯甲烷體積比為100:0至O:100洗脫；然后再用二氯甲烷和乙酸乙酯體積比為，100:0至O:100 ;最后用乙酸乙酯和甲醇體積比100:0至O:100。洗脫過程中，采用硅膠薄層色譜跟蹤，脂肪酸相同斑點(diǎn)洗脫部位合并，濃縮得到脂肪酸有效部位63g;
(3)取步驟(2)制備得到的脂肪酸有效部位與濃度為1.0mol/L氫氧化鈉水溶液回流提取30分鐘,然后用乙醚 萃取,取水相,然后用濃度為1.0 mol /L鹽酸溶液酸化，然后用乙醚萃取，取乙醚層，濃縮乙醚溶劑后用正己烷溶解，然后用體積比為2:98的硫酸:甲醇溶液回流提取I小時(shí)，然后用正已烷萃取，濃縮正已烷后得到重量含量為93至95%的脂肪酸甲酯有效部位；
經(jīng)化學(xué)成分分析，所述的脂肪酸甲酯有效部位包括棕櫚酸甲酯，硬脂酸甲酯，油酸甲酯，亞油酸甲酯，肉豆蘧酸甲酯，亞麻酸甲酯。并且脂肪酸甲酯有效部位中含有重量含量為71%至75%的不飽和脂肪酸甲酯。實(shí)施例3番荔枝脂肪酸有效部位體外對人腫瘤細(xì)胞的抑制作用
以人肝癌(SMMC-7721),人肝癌(HepG2),人宮頸癌(Hela),肺癌(A-549),人乳腺癌(MCF-7)，采用噻唑藍(lán)還原法(MTT)進(jìn)行體外抗腫瘤實(shí)驗(yàn)，取實(shí)施例1制備得到的番荔枝脂肪酸有效部位各設(shè)5個(gè)濃度，以樣品的溶劑即二甲亞砜為陰性對照組。所用小鼠為清潔級昆明小鼠。由表I的半數(shù)抑制濃度(IC5tl)實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，本發(fā)明制備得到的番荔枝脂肪酸有效部位對5株人腫瘤細(xì)胞的顯示很好的抑制作用；
表I番荔枝脂肪酸有效部位對5株腫瘤細(xì)胞的抑制作用(IC5tl半數(shù)抑制率)
權(quán)利要求
1.一種具有抗腫瘤活性的番荔枝的脂肪酸有效部位，其特征在于，它由下列方法制備得到: (1)取番荔枝種子，打粉后用正己烷或石油醚回流提取2至3次，合并提取液，濃縮后得到提取物； (2)取步驟(I)得到的提取物，上硅膠柱層析，采用正己烷-二氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇為洗脫劑，極性從低到高依次洗脫，得到重量含量為81%至85%的脂肪酸有效部位； 所述的脂肪酸有效部位包括棕櫚酸、硬脂酸、油酸、亞油酸、肉豆蘧酸和亞麻酸。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的具有抗腫瘤活性的番荔枝的脂肪酸有效部位，其特征在于，脂肪酸有效部位中含有重量含量為51%至55%的不飽和脂肪酸。
3.一種具有抗腫瘤活性的番荔枝的脂肪酸甲酯有效部位，其特征在于:它由下列方法制備得到: (1)取番荔枝種子，打粉后用正己烷或石油醚回流提取2至3次，合并提取液，濃縮后得到提取物； (2)取步驟(I)得到的提取物，上硅膠柱層析，采用正己烷-二氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇為洗脫劑，極性從低到高依次洗脫，得到重量含量為81%至85%的脂肪酸有效部位，其中不飽和脂肪酸的重量含量為51%至55% ； (3)取步驟(2)制備得到的脂肪酸有效部位與濃度為1.0mol/L氫氧化鈉水溶液回流提取30至60分鐘,然后用乙醚萃取,取水 相,然后用濃度為1.0 mol/L鹽酸溶液酸化，然后用乙醚萃取，取乙醚層，濃縮乙醚溶劑后用正己烷溶解，然后用體積比為2:98的硫酸:甲醇溶液回流提取I至3小時(shí)，然后用正已烷萃取，濃縮正已烷后得到重量含量為93%至95%的脂肪酸甲酯有效部位； 所述的脂肪酸甲酯有效部位包括棕櫚酸甲酯，硬脂酸甲酯，油酸甲酯，亞油酸甲酯，肉豆蘧酸甲酯，亞麻酸甲酯。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的具有抗腫瘤活性的番荔枝的脂肪酸甲酯有效部位，其特征在于:脂肪酸甲酯有效部位中含有重量含量為71%至75%的不飽和脂肪酸甲酯。
5.根據(jù)權(quán)利要求1或3所述的具有抗腫瘤活性的番荔枝脂肪酸有效部位，其特征在于:所述的洗脫劑的梯度洗脫程序?yàn)?先用正己烷和二氯甲烷體積比為100:0至O:100依次洗脫；然后再用二氯甲烷和乙酸乙酯體積比為100:0至O:100依次洗脫；最后用乙酸乙酯和甲醇體積比100:0至O:100依次洗脫。
6.權(quán)利要求1或2所述的具有抗腫瘤活性的番荔枝脂肪酸有效部位在制備防治肺癌、肝癌、宮頸癌或乳腺癌藥物中的應(yīng)用。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述具有抗腫瘤活性的番荔枝脂肪酸有效部位在制備防治肺癌、肝癌、宮頸癌或乳腺癌藥物中的應(yīng)用，其特征在于，把番荔枝脂肪酸有效部位和藥學(xué)上可接受的載體制成片劑、膠囊劑、脂肪乳劑、栓劑、微囊、滴丸、軟膏劑劑型的藥物。
8.權(quán)利要求3或4所述的具有抗腫瘤活性的番荔枝脂肪酸甲酯有效部位在制備防治乳腺癌、腎癌或人黑色素癌藥物中的應(yīng)用。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的具有抗腫瘤活性的番荔枝脂肪酸甲酯有效部位在制備防治乳腺癌、腎癌或人黑色素癌藥物中的應(yīng)用，其特征在于，把番荔枝脂肪酸有效部位和藥學(xué)上可接受的載體制成片劑、膠囊劑、脂肪乳劑、栓劑、微囊、滴丸、軟膏劑劑型的藥物。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種具有抗腫瘤活性的番荔枝脂肪酸有效部位及其番荔枝脂肪酸甲酯有效部位，本發(fā)明以番荔枝種子為原料，采用有機(jī)溶劑提取，柱層析法分離及有機(jī)溶劑萃取分離等方法，并且結(jié)合藥理實(shí)驗(yàn)篩選，優(yōu)化制備得到具有很好抗腫瘤活性的番荔枝脂肪酸及其番荔枝脂肪酸甲酯有效部位。本發(fā)明變廢為寶，以現(xiàn)有資源開發(fā)出番荔枝種子中脂肪酸有效部位或脂肪酸甲酯有效部位的抗腫瘤新用途，為番荔枝種子中的脂肪油提供了新的臨床用途，且番荔枝資源廣泛，可形成產(chǎn)業(yè)化，具有重要的社會(huì)效益和經(jīng)濟(jì)效應(yīng)。
文檔編號(hào)A61P35/00GK103239491SQ201310199439
公開日2013年8月14日 申請日期2013年5月27日 優(yōu)先權(quán)日2013年5月27日
發(fā)明者李祥, 陳勇, 陳建偉, 王玉, 苗筠杰, 邱海龍, 袁斐 申請人:南京中醫(yī)藥大學(xué)