專利名稱：甲磺酸去鐵胺在制備治療絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松疾病藥物中的用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及甲磺酸去鐵胺的用途，特別涉及甲磺酸去鐵胺在制備治療絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松疾病藥物中的用途。
背景技術(shù)：
甲磺酸去鐵胺(DFO)的化學(xué)名稱為N-[5-[3-[(5-氨戊基)_羥氨甲酰]-丙酰氨] 戊基]-3-[[ (5- (N-羥乙酰胺)戊基]-氨甲酰]-丙稀-羥甲磺酸，分子式為C25H48N6O8. CH3SO3H,分子量為656. 8。甲磺酸去鐵胺是一種螯合劑，主要與三價鐵離子和鋁離子形成螯合物，其螯合物形成常數(shù)分別為IO31和1025，由于其螯合特性，無論血漿中或者細(xì)胞中的游離鐵，均能與之結(jié)合，形成鐵胺螯合物。臨床上主要用于慢性鐵負(fù)荷過載、急性鐵中毒、晚期腎功能衰竭患者的慢性鋁負(fù)荷過載的治療及用于鐵或鋁負(fù)荷過載的診斷。近幾年動物實驗研究表明去鐵胺對肝移植缺血再灌注、急性缺血性腎衰竭、急性缺血缺氧腦病等均具有保護(hù)作用。
近年來的研究發(fā)現(xiàn)鐵代謝與骨代謝關(guān)系密切。2005年，Guggenbuhl等報道在 38例男性遺傳性血色病確診患者中，骨量減少的患者比例為78. 9%，而骨質(zhì)疏松的比例也達(dá)34.2%。2006年，Liu等去除大鼠卵巢制作骨質(zhì)疏松模型，然后觀察大鼠體內(nèi)鐵的變化， 結(jié)果顯示去勢大鼠體內(nèi)游離鐵的含量較假手術(shù)組顯著增加；為了進(jìn)一步證實該骨質(zhì)疏松模型的形成與鐵有關(guān)，Liu等又在大鼠去勢后第二天開始給予口服鐵螯合劑，九周后觀察其對骨質(zhì)疏松模型形成的影響，結(jié)果顯示口服鐵螯合劑之后骨礦物質(zhì)密度依舊比假手術(shù)組低，但是與未口服鐵螯合劑相比，骨礦物質(zhì)密度顯著增加。2009年，Jian等研究指出絕經(jīng)過渡期女性體內(nèi)雌二醇水平和鐵蛋白水平正好向相反的方向變化，雌激素水平下降的同時體內(nèi)鐵蛋白水平升高2010年，Tsay等在《Blood》雜志報道大鼠腹腔內(nèi)注射右旋糖酐鐵2 周后，大鼠部分器官鐵含量顯著增加，同時發(fā)現(xiàn)骨微結(jié)構(gòu)、骨小梁和皮質(zhì)骨厚度發(fā)生明顯改變，骨吸收增加，并且鐵過載使大鼠體內(nèi)活性氧(ROS)增加；給予鐵過載大鼠抗氧化劑N-乙酰-L-半胱氨酸處理后，大鼠骨小梁的發(fā)育異常得到有效抑制。綜上所述，鐵是獨立于雌激素以外的另一個絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥的危險因素。目前關(guān)于甲磺酸去鐵胺治療絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松的研究還沒有報道。發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明解決的問題在于提供一種甲磺酸去鐵胺在制備治療絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松疾病藥物中的用途。
為了解決現(xiàn)有技術(shù)中的這些問題，本發(fā)明的的技術(shù)方案是甲磺酸去鐵胺在制備治療絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松疾病藥物中的用途。
根據(jù)甲磺酸去鐵胺治療絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松的動物實驗結(jié)果，以及甲磺酸去鐵胺臨床用藥方法，本發(fā)明在治療絕經(jīng)后婦女骨質(zhì)疏松疾病時，優(yōu)選地，所述的甲磺酸去鐵胺給藥量為每日 15_60mg/Kg。
優(yōu)選地，所述的甲磺酸去鐵胺給藥量為每日20-50mg/Kg。
優(yōu)選地，所述的甲磺酸去鐵胺加在生理鹽水中緩慢皮下或靜脈輸注。
優(yōu)選地，所述的甲磺酸去鐵胺每次輸注8-Mh，每周3次。
優(yōu)選地，所述的甲磺酸去鐵胺給藥劑量是口服劑量。
不僅作為臨床用藥用于鐵或鋁相關(guān)性疾病的診斷和治療，也作為一個工具藥在科學(xué)研究中被廣泛應(yīng)用。我們用甲磺酸去鐵胺干預(yù)絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松動物模型發(fā)現(xiàn)其具有抗骨質(zhì)疏松作用。這一發(fā)現(xiàn)將對絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松疾病的研究和治療產(chǎn)生重大的影響，并有臨床實用價值，為甲磺酸去鐵胺開辟了新的臨床途徑。
甲磺酸去鐵胺人用給藥可以制成包含該化合物的可吸收膠囊，例如明膠膠囊，或制成糖漿、溶劑或懸浮液，適宜的液體藥物載體包括乙醇、甘油、鹽水和水，可以將香料、色素等加入其中形成糖漿，也可設(shè)計成持續(xù)釋放制劑，例如含腸溶包衣的片劑。人用口服途徑給藥，若是片劑，那么任何適宜于配置此種固體組合物的藥物載體，入硬脂酸鎂、淀粉、乳糖、葡萄糖、米粉、面粉和白堊等均可使用。
就非腸道給藥而言，則制成含該化合物和無菌載體的流體單位計量形式，根據(jù)載體和濃度不同，該化合物可以懸浮或者是溶解于其中。非腸道給藥的溶液一般制備方法是， 將化合物溶于載體中，無菌過濾，然后沖注入適宜的小瓶或安培瓶密封，最好是將防腐劑和緩沖劑之類的佐劑也溶于載體中，為提高穩(wěn)定性，組合物在注入到小瓶之后使其冷凍并凍真空除水。
非腸道的給藥的懸浮液或溶液制備方法基本相同，最好將表面活性劑或濕潤劑加入組合物中，有利于甲磺酸去鐵胺的均勻分散。
優(yōu)選的非腸道制劑包括使用無菌水或普通生理鹽水的水液制劑。
本發(fā)明的優(yōu)點是1.甲磺酸去鐵胺作為臨床用藥，已被證明毒性小、安全；2.甲磺酸去鐵胺可顯著的減少絕經(jīng)后骨量的丟失。


下面結(jié)合附圖及實施例對本發(fā)明作進(jìn)一步描述 圖1顯示了實驗各組的大鼠松質(zhì)骨骨密度的檢測值。
圖2顯示了實驗各組的大鼠松質(zhì)骨體積分?jǐn)?shù)(BV/TV)檢測值。
圖3顯示了實驗各組的大鼠骨小梁數(shù)量檢測值。
圖4顯示了實驗各組的大鼠骨小梁間隔檢測值。
圖5為Micro-CT掃描實驗各組大鼠的股骨下端的二維圖像；其中A為SHAM組，B 為 OVX 組，C 為 DF0+0VX 組。
圖6為Micro-CT掃描實驗大鼠的股骨下端并進(jìn)行三維圖像重建顯示；其中A’為 SHAM 組，B，為 OVX 組，C，為 DF0+0VX 組。
圖7為不同濃度的DFO對成骨細(xì)胞凋亡的影響。左下區(qū)域活細(xì)胞(Armexin V -/4PI-)；右下區(qū)域早期凋亡細(xì)胞(Annexin V +/PI-)；右上區(qū)域已死亡細(xì)胞(Annexin V +/ PI+)。
圖8為不同濃度的DFO對成骨細(xì)胞礦化的影響。
具體實施方式
為了便于理解，以下將通過具體的實施例對本發(fā)明進(jìn)行詳細(xì)地描述。需要特別指出的是，這些描述僅僅是示例性的描述，并不構(gòu)成對本發(fā)明范圍的限制。依據(jù)本說明書的論述，本發(fā)明的許多變化、改變對所屬領(lǐng)域技術(shù)人員來說都是顯而易見的。
實施例根據(jù)甲磺酸去鐵胺治療絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松的動物實驗結(jié)果，以及甲磺酸去鐵胺臨床用藥方法，本發(fā)明在治療絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松疾病時，可采用甲磺酸去鐵胺緩慢靜脈輸注， 每次50mg/kg，每周3次。
支持本實驗的研究結(jié)果如下實驗分組情況如下假手術(shù)SHAM組、去卵巢OVX組和甲磺酸去鐵胺(DF0+0VX)組。每組SD大鼠6只。
SHAM組為切開皮膚、肌肉僅探及卵巢，不去除卵巢，去除手術(shù)這一技術(shù)操作對實驗結(jié)果的干擾；OVX組為切開皮膚、肌肉后切除大鼠雙側(cè)卵巢；DF0+0VX組為去除大鼠雙側(cè)卵巢后給予甲磺酸去鐵胺DFO 100mg/Kg (溶于生理鹽水) 腹腔注射，每周三次，共持續(xù)12周，而其它兩組給予生理鹽水腹腔注射對照。
結(jié)果發(fā)現(xiàn)與SHAM組相比，去卵巢OVX組大鼠血清鐵較假手術(shù)SHAM組顯著增高(P<0.01)；使用DFO干預(yù)后，DF0+0VX組血清鐵較去卵巢OVX組大鼠血清鐵顯著降低 (P<0.01)(見表1)。實驗結(jié)果提示DF0能顯著降低去勢大鼠血清鐵水平。
表1各組大鼠血清鐵濃度組別假手術(shù)(SHAM)組去卵巢(OV)Q組甲磺酸去鐵胺(DF0+0VX)組血清鐵(umol/ml) 35. 6±1.9_59. 7±3. 5 ▲_42. 3±2. 0 ▲*_注0VX 組、DF0+0VX 組與 SHAM 組相比▲ P<0. 01，DF0+0VX 組與 OVX 組相比★ P<0. 01.通過上述實驗可以，DFO能增加去勢大鼠松質(zhì)骨骨密度、松質(zhì)骨體積、骨小梁數(shù)量及厚度，降低骨小梁間隔，從而改善骨微結(jié)構(gòu)。
實驗分組情況及干預(yù)同上。12周后，所有大鼠取股骨下段標(biāo)本行Micro-CT檢查。檢測指標(biāo)為大鼠松質(zhì)骨骨密度(BMD)、松質(zhì)骨體積、骨小梁數(shù)量，骨小梁間隔。大鼠松質(zhì)骨骨密度、松質(zhì)骨體積、骨小梁數(shù)量與骨質(zhì)疏松呈正相關(guān)，骨小梁間隔與骨質(zhì)疏松呈負(fù)相關(guān)。骨小梁間隔越大，骨質(zhì)越疏松。
結(jié)果如圖1-4所示，圖1顯示OVX組及甲磺酸去鐵胺干預(yù)(DF0+0VX)組與SHAM組相比Pa<0. 01，DF0+0VX組與OVX組相比Pb<0. 01，說明DFO能顯著增加松質(zhì)骨骨密度BMD。 圖2顯示DF0干預(yù)后的DF0+0VX組與OVX組相比松質(zhì)骨體積分?jǐn)?shù)顯著增加，Pb<0. 01 ；圖 3顯示:DF0+0VX組與OVX組相比骨小梁數(shù)量顯著增加，Pb<0. 01 ；圖4顯示=DFO干預(yù)后的5DF0+0VX組與OVX組相比骨小梁間隔顯著降低，Pb<0. 01。
圖5所示，運用Micro-CT掃描上述三組實驗大鼠的股骨下端的二維圖像，并進(jìn)行圖像重建及定量分析，可以較準(zhǔn)確的描述骨密度及骨微結(jié)構(gòu)，從而判定骨質(zhì)疏松的程度。其中，A為SHAM組，B為OVX組，C為DF0+0VX組。二維圖像顯示與OVX組相比，DFO干預(yù)后的DF0+0VX組的骨小梁數(shù)量明顯增多，骨小梁間隔顯著減小。
圖6為Micro-CT掃描實驗大鼠的股骨下端并進(jìn)行三維圖像重建顯示；其中，A’為 SHAM組，B，為OVX組，C，為DF0+0VX組。三維圖像重建顯示DF0干預(yù)后的DF0+0VX組比 OVX組的骨微結(jié)構(gòu)顯著改善。
我們發(fā)現(xiàn)應(yīng)用DFO干預(yù)去卵巢大鼠12周后，雖然不能恢復(fù)到對照組(假手術(shù))組水平，但與去卵巢(OVX)組相比，松質(zhì)骨骨密度(BMD)、松質(zhì)骨體積分?jǐn)?shù)(BV/TV)、骨小梁數(shù)量 (Tb. N)明顯增加(P<0.01)，骨小梁間隔明顯減小(P<0.01)?；谝陨蠈嶒炞C據(jù)，我們得出結(jié)論DF0抗骨質(zhì)疏松有效。且臨床已有的研究表明女性絕經(jīng)后體內(nèi)鐵蓄積增加。
DFO對人成骨細(xì)胞凋亡及鈣結(jié)節(jié)形成的影響鈣結(jié)節(jié)是成骨細(xì)胞在體外培養(yǎng)時形成礦化的細(xì)胞外基質(zhì)，是成骨細(xì)胞分化的最后階段。因此鈣結(jié)節(jié)不僅是鑒定成骨細(xì)胞的重要指標(biāo)之一，也是成骨細(xì)胞礦化成骨的最終體現(xiàn)。 用不同濃度的DF0(0、5、10、20umol/L)加入人成骨細(xì)胞培養(yǎng)基中，流式細(xì)胞儀檢測成骨細(xì)胞凋亡；Von kossa染色法行鈣結(jié)節(jié)染色。結(jié)果發(fā)現(xiàn)(1 )DF0干預(yù)成骨細(xì)胞4 后，細(xì)胞凋亡率與對照組比較在5umOl/L、10umOl/L濃度組明顯減少，組間比較有顯著差異(P < 0. 05)； 在20umol/L濃度組細(xì)胞凋亡率與對照組比較顯著增加(P < 0.05)如圖7所示。(2)DF0組在5UmOl/L、10UmOl/L濃度時使成骨細(xì)胞礦化能力增強，鈣化面積、礦化鈣結(jié)節(jié)均增多，而 20umol/L濃度時則抑制成骨細(xì)胞礦化功能，如圖8所示。
上述實例只為說明本發(fā)明的技術(shù)構(gòu)思及特點，其目的在于讓熟悉此項技術(shù)的人是能夠了解本發(fā)明的內(nèi)容并據(jù)以實施，并不能以此限制本發(fā)明的保護(hù)范圍。凡根據(jù)本發(fā)明精神實質(zhì)所做的等效變換或修飾，都應(yīng)涵蓋在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。
權(quán)利要求
1.甲磺酸去鐵胺在制備治療絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松疾病藥物中的用途。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用途，其特征在于，所述的甲磺酸去鐵胺給藥劑量為每日 15-60mg/Kgo
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的用途，其特征在于，所述的甲磺酸去鐵胺加在生理鹽水中緩慢皮下或靜脈輸注。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用途，其特征在于，所述的甲磺酸去鐵胺給藥劑量為每日 20-50mg/Kgo
5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的用途，其特征在于，所述的甲磺酸去鐵胺每次輸注814h，每周3次。
6.根據(jù)權(quán)利要求2所述的用途，其特征在于，所述的甲磺酸去鐵胺給藥劑量是口服劑量。
全文摘要
本發(fā)明涉及甲磺酸去鐵胺的用途，特別涉及甲磺酸去鐵胺在制備治療絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松疾病藥物中的用途。甲磺酸去鐵胺毒性小、安全；可顯著的減少絕經(jīng)后骨量的丟失。
文檔編號A61K31/16GK102526005SQ20111043711
公開日2012年7月4日 申請日期2011年12月23日 優(yōu)先權(quán)日2011年12月23日
發(fā)明者俞晨, 徐又佳, 李光飛, 李凱, 高超 申請人:蘇州大學(xué)