專利名稱：一種逆轉(zhuǎn)腫瘤多藥耐藥的中藥組合物及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于中藥領(lǐng)域，特別涉及一種逆轉(zhuǎn)腫瘤多藥耐藥的中藥組合物及其制備方法。
背景技術(shù)：
腫瘤細(xì)胞對(duì)抗腫瘤藥物的多藥耐藥(multidrug resistance, MDR)是導(dǎo)致腫瘤化學(xué)藥物治療失敗的常見因素。目前國(guó)內(nèi)腫瘤患病率呈上升趨勢(shì)，并且90%的腫瘤患者死亡在不同程度上受腫瘤耐藥的影響，這就急切尋求符合上述理想的新一代耐藥逆轉(zhuǎn)劑。已知某些中藥具有鈣拮抗作用，且藥物作用較溫和，能在逆轉(zhuǎn)MDR中提高化療效果，具有很好的應(yīng)用和開發(fā)前景。現(xiàn)有的研究結(jié)果表明多種機(jī)制參與腫瘤細(xì)胞多藥耐藥形成，主要包括細(xì)胞 膜 P-糖蛋白(PermeabiIity-glycoprotein, P-gP)、多藥耐藥相關(guān)蛋白(MultidrugResistance Associated Protein,MRP)過度表達(dá)形成藥物外輸泵,使抗癌藥物在腫瘤細(xì)胞內(nèi)蓄積下降；谷胱甘肽-S-轉(zhuǎn)移酶(GST)單獨(dú)或與谷胱甘肽(GSH) —起參與多種細(xì)胞毒代謝及解毒過程；與細(xì)胞凋亡相關(guān)的因子及基因如bcl-2，P53等異常。國(guó)內(nèi)外針對(duì)上述環(huán)節(jié)進(jìn)行了廣泛研究以尋求拮抗和/或逆轉(zhuǎn)腫瘤細(xì)胞MDR，體外被證實(shí)具有逆轉(zhuǎn)耐藥活性的化合物或生物制劑很多，但真正進(jìn)入臨床研究的只有異博定、環(huán)孢菌素A等極少數(shù)，而且療效不理想。目前還沒有一種藥物或方法在臨床被廣泛接受原因在于現(xiàn)有逆轉(zhuǎn)劑大多為“老藥新用”，逆轉(zhuǎn)耐藥往往不是其主要功能，臨床使用禁忌癥多，毒副作用大；生物制劑在體內(nèi)不穩(wěn)定，難以作用到靶點(diǎn)且毒副反應(yīng)多；臨床耐藥往往數(shù)種機(jī)制同時(shí)參與，只對(duì)單一機(jī)制起作用的逆轉(zhuǎn)劑難以發(fā)揮顯著的效應(yīng)。其中對(duì)于中藥或有效單體成分研究而言，真正能結(jié)合臨床療效和中醫(yī)理論的研究少見。中國(guó)發(fā)明專利CN200710070320. 4公開了 “姜黃素在制備腫瘤多藥耐藥預(yù)防劑中的用途”，中國(guó)發(fā)明專利CN200710143393. I公開了“青蒿素在制備抗腫瘤多藥耐藥藥物中的應(yīng)用”；目前有關(guān)制備腫瘤多藥耐藥逆轉(zhuǎn)劑的發(fā)明專利還未見中藥組合物的報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容
為了解決上述現(xiàn)有技術(shù)中存在的不足之處，本發(fā)明的首要目的在于提供一種逆轉(zhuǎn)腫瘤多藥耐藥中藥組合物。該中藥組合物由四種中藥原料制備而成，本發(fā)明的中藥組合物起到逆轉(zhuǎn)腫瘤多藥耐藥作用，且該中藥組合物無毒副作用。本發(fā)明的另一個(gè)目的在于提供一種逆轉(zhuǎn)腫瘤多藥耐藥中藥組合物的制備方法。本發(fā)明通過以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)一種逆轉(zhuǎn)腫瘤多藥耐藥的中藥組合物，由如下按照重量份數(shù)計(jì)的中藥原料制備而成五倍子10 30份，透骨草10 30份，火炭母10 30份，山豆根10 30份。上述逆轉(zhuǎn)腫瘤多藥耐藥的中藥組合物，更加優(yōu)選由下述按重量份數(shù)計(jì)的中藥原料制備而成五倍子12份，透骨草18份，火炭母18份，山豆根12份。
一種逆轉(zhuǎn)腫瘤多藥耐藥的中藥組合物的制備方法，包括如下步驟(I)取以下重量份數(shù)計(jì)的中藥原料五倍子10 30份，透骨草10 30份，火炭母10 30份，山豆根10 30份粉碎，備用；(2)用重量為步驟(I)所述中藥原料2倍重量的體積分?jǐn)?shù)80%的乙醇浸泡后，過濾，收集濾液，回收乙醇，濃縮；濃縮液中加入重量為濃縮液2倍重量的體積分?jǐn)?shù)70%的乙醇溶解，靜置，過濾，收集濾液，回收乙醇，濃縮至密度為1.01 I. lOg/cm3，真空干燥，干燥物粉碎，過篩得細(xì)粉，即得逆轉(zhuǎn)腫瘤多藥耐藥的中藥組合物。步驟(2)所述的浸泡時(shí)間為24 48小時(shí)；所述靜置的時(shí)間為24 48小時(shí)；所述真空干燥的溫度為60 80°C，時(shí)間為6 12小時(shí)；
所述過篩是過目數(shù)為40 80目的篩網(wǎng)。本發(fā)明的原理在于各種中藥原料的藥理療效如下五倍子味酸、澀、性寒，具有斂肺、止汗、澀腸、固精、止血、解毒功效；透骨草甘、苦、溫，具有祛風(fēng)濕、活血、舒筋、止痛功效；火炭母酸、甘、寒，具有清熱解毒、利濕消滯、涼血止癢功效；山豆根苦、寒，具有清火、解毒、消腫、止痛功效。本發(fā)明采用各種中藥原料配伍，從中醫(yī)角度認(rèn)為起到清熱解毒功效；本發(fā)明中藥組合物中原料藥組合緊湊，可有效起到逆轉(zhuǎn)腫瘤多藥耐藥的作用。本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比，具有如下優(yōu)點(diǎn)和有益效果中國(guó)發(fā)明專利CNl 762450A公開的專利“五味子在制備抗腫瘤藥物及其腫瘤多藥耐藥逆轉(zhuǎn)劑中的應(yīng)用”，該專利的只是針對(duì)“五味子”這單一藥材；中國(guó)發(fā)明專利CN101164534A公開的專利“姜黃素在制備腫瘤多藥耐藥預(yù)防劑的應(yīng)用”是針對(duì)中藥材姜黃中的單體成分姜黃素的作用；而這些單一中藥的作用未在中醫(yī)藥理論指導(dǎo)下組方用藥，與本發(fā)明中藥復(fù)方制劑的作用具有區(qū)別，本發(fā)明采用各種中藥原料配伍，從中醫(yī)角度認(rèn)為起到清熱解毒功效；本發(fā)明中藥組合物中原料藥組合緊湊，可有效起到逆轉(zhuǎn)腫瘤多藥耐藥的作用，且該中藥組合物無毒副作用；本發(fā)明生產(chǎn)方法簡(jiǎn)便，用藥成本不高。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明本發(fā)明組合物含藥血清與ADR聯(lián)合用可使ADR對(duì)K562/ADR的IC5tl明顯下降，不同給藥濃度對(duì)K562/ADR逆轉(zhuǎn)倍數(shù)為I. 60 4. 00，且呈濃度正相關(guān)，這表明本發(fā)明中藥組合物對(duì)K562/ADR耐藥株具有逆轉(zhuǎn)作用。
具體實(shí)施例方式下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)的描述，但本發(fā)明的實(shí)施方式不限于此。實(shí)施例I :I、按下述重量配比稱取各中藥原料五倍子100克，透骨草100克，火炭母100克，山豆根100克，粉碎，備用。2、將上述粉碎后的中藥原料加入到800克的體積分?jǐn)?shù)為80%乙醇浸泡24小時(shí)后，過濾，收集濾液，回收乙醇，濃縮；濃縮液中加入重量為濃縮液2倍重量的體積分?jǐn)?shù)70 %的乙醇溶解，靜置24小時(shí)后，過濾，收集濾液，回收乙醇，濃縮至密度為I. Olg/cm3，60°C真空干燥6小時(shí)，得干燥物30克，粉碎，過40目篩得細(xì)粉，即得逆轉(zhuǎn)腫瘤多藥耐藥的中藥組合物。
實(shí)施例2 I、按下述重量配比稱取各中藥原料五倍子200克，透骨草200克，火炭母200克，山豆根200克。2、將上述粉碎后的中藥原料加入到1600克的體積分?jǐn)?shù)為80%乙醇浸泡36小時(shí)后，過濾，收集濾液，回收乙醇，濃縮；濃縮液中加入重量為濃縮液2倍重量的體積分?jǐn)?shù)70%的乙醇溶解，靜置36小時(shí)后，過濾，收集濾液，回收乙醇，濃縮至密度為I. 06g/cm3，8(TC真空干燥8小時(shí)，得干燥物60克，粉碎，過60目篩得細(xì)粉，即得逆轉(zhuǎn)腫瘤多藥耐藥的中藥組合物。實(shí)施例3 I、按下述重量配比稱取各中藥原料五倍子300克，透骨草300克，火炭母300克， 山豆根300克。2、將上述粉碎后的中藥原料加入到2400克的體積分?jǐn)?shù)為80%乙醇浸泡48小時(shí)后，過濾，收集濾液，回收乙醇，濃縮；濃縮液中加入重量為濃縮液2倍重量的體積分?jǐn)?shù)70%的乙醇溶解，靜置48小時(shí)后，過濾，收集濾液，回收乙醇，濃縮至密度為I. lOg/cm3，80°C真空干燥12小時(shí)，得干燥物90克，粉碎，過80目篩得細(xì)粉，即得逆轉(zhuǎn)腫瘤多藥耐藥的中藥組合物。實(shí)施例4 I、按下述重量配比稱取各中藥原料五倍子120克，透骨草180克，火炭母180克，山豆根120克。2、將上述粉碎后的中藥原料加入到1200克的體積分?jǐn)?shù)為80%乙醇浸泡24小時(shí)后，過濾，收集濾液，回收乙醇，濃縮；濃縮液中加入重量為濃縮液2倍重量的體積分?jǐn)?shù)70%的乙醇溶解，靜置24小時(shí)后，過濾，收集濾液，回收乙醇，濃縮至密度為I. 04g/cm3, 70°C真空干燥10小時(shí)，得干燥物45克，粉碎，過60目篩得細(xì)粉，即得逆轉(zhuǎn)腫瘤多藥耐藥的中藥組合物。實(shí)施例5 白血病細(xì)胞K562/S為白血病敏感株，K562/ADR為白血病細(xì)胞阿霉素耐藥株。K562/ADR是由K562/S細(xì)胞接觸遞增濃度的ADR (阿霉素)誘導(dǎo)而成，具有典型多藥耐藥性。細(xì)胞株均培養(yǎng)于含10%小牛血清的RPMI-1640培養(yǎng)液中。細(xì)胞株購(gòu)買于中山大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心。含藥血清制備重量為20±2克NIH小鼠適應(yīng)性飼養(yǎng)3天后，稱重，根據(jù)隨機(jī)數(shù)目表隨機(jī)分為高劑量組、中劑量組、低劑量組、空白組共4組，每組10只；給藥方法與劑量小鼠于高劑量組按本中藥組合物40g/kg灌胃給藥，中劑量組按20g/kg灌胃給藥，低劑量組按10g/kg灌胃給藥；空白對(duì)照組以生理鹽水灌胃。其中，所用的NIH小鼠購(gòu)買于中山大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心。給藥2h后，取血，3000轉(zhuǎn)/分離心10分鐘，分離血清，56°C滅活30min，用RPMI1640配制不同濃度的血清培養(yǎng)液。取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞，K562/ADR細(xì)胞以I X 105/ml、K562/S以O(shè). 5X105/ml分別接種于96孔培養(yǎng)板，100 μ I/孔。在37°C、5%C02條件下培養(yǎng)過夜后，加不同濃度的受試含藥血清和ADR共100 μ 1，調(diào)零組和對(duì)照組加相應(yīng)體積的培養(yǎng)液，每組設(shè)4個(gè)平行孔。培養(yǎng)72h后，每孔加5mg/ml MTT20 μ 1(調(diào)零組除外)，再培養(yǎng)4h，傾去培養(yǎng)液，加DMS0100 μ I/孔，待完全溶解后，用酶聯(lián)免疫儀在波長(zhǎng)570nm處調(diào)零組調(diào)零后讀取吸光度(A)值。取4孔A值的均數(shù)按公式計(jì)算細(xì)胞抑制率；細(xì)胞抑制率(IR) =[1-(試驗(yàn)孔A均值/對(duì)照孔A均值)]X 100%。計(jì)算IR并求出半數(shù)抑制濃度(IC5tl),以上實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。逆轉(zhuǎn)倍數(shù)=IC50對(duì)照組/IC50受試組IC50對(duì)照組為對(duì)照組的K562/S或K562/ADR IC50值；IC5tl受試組為不同劑量給藥組的IC5tl值。表I本發(fā)明中藥組合物對(duì)K562/ADR耐藥株的逆轉(zhuǎn)作用
權(quán)利要求
1.一種逆轉(zhuǎn)腫瘤多藥耐藥的中藥組合物，其特征在于該中藥組合物由下述按重量份數(shù)計(jì)的中藥原料制備而成五倍子10 30份,透骨草10 30份，火炭母10 30份，山豆根10 30份。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的一種逆轉(zhuǎn)腫瘤多藥耐藥的中藥組合物，其特征在于該中藥組合物由下述按重量份數(shù)計(jì)的中藥原料制備而成五倍子12份，透骨草18份，火炭母18份，山豆根12份。
3.根據(jù)權(quán)利要求I或2所述的一種逆轉(zhuǎn)腫瘤多藥耐藥的中藥組合物的制備方法，其特征在于包括如下步驟 (1)取以下重量份計(jì)中藥原料五倍子10 30份，透骨草10 30份，火炭母10 30份，山豆根10 30份，粉碎，備用； (2)用重量為步驟(I)所述中藥原料2倍重量的體積分?jǐn)?shù)80%的乙醇浸泡后，過濾，收集濾液，回收乙醇，濃縮；濃縮液中加入重量為濃縮液2倍重量的體積分?jǐn)?shù)70%的乙醇溶解，靜置，過濾，收集濾液，回收乙醇，濃縮至密度為1.01 I. lOg/cm3，真空干燥，干燥物粉碎，過篩得細(xì)粉，即得逆轉(zhuǎn)腫瘤多藥耐藥的中藥組合物。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的一種逆轉(zhuǎn)腫瘤多藥耐藥的中藥組合物的制備方法，其特征在于步驟(2)所述的浸泡時(shí)間為24 48小時(shí)。
5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的一種逆轉(zhuǎn)腫瘤多藥耐藥的中藥組合物的制備方法，其特征在于步驟(2)所述靜置的時(shí)間為24 48小時(shí)。
6.根據(jù)權(quán)利要求3所述的一種逆轉(zhuǎn)腫瘤多藥耐藥的中藥組合物的制備方法，其特征在于步驟(2)所述真空干燥的溫度為60 80°C，時(shí)間為6 12小時(shí)。
7.根據(jù)權(quán)利要求3所述的一種逆轉(zhuǎn)腫瘤多藥耐藥的中藥組合物的制備方法，其特征在于步驟(2)中所述過篩是過目數(shù)為40 80目的篩網(wǎng)。
全文摘要
本發(fā)明屬于中藥領(lǐng)域，公開了一種逆轉(zhuǎn)腫瘤多藥耐藥的中藥組合物及其制備方法，該中藥組合物由以下重量份計(jì)的中藥原料制備而成10～30的五倍子，10～30的透骨草，10～30的火炭母，10～30的山豆根。制備方法包括步驟將五倍子、透骨草、火炭母和山豆根粉碎，用重量為上述中藥原料重量2倍的體積分?jǐn)?shù)為80%乙醇浸泡，過濾，收集濾液，回收乙醇，濃縮；將濃縮液加入體積分?jǐn)?shù)為70%乙醇溶解，靜置，過濾，收集濾液，回收乙醇，濃縮至密度為1.01～1.10g/cm3，真空干燥，干燥物粉碎，過篩得到細(xì)粉，即得逆轉(zhuǎn)腫瘤多藥耐藥的中藥組合物。本發(fā)明的中藥組合物起到逆轉(zhuǎn)腫瘤多藥耐藥作用，且該中藥組合物無毒副作用。
文檔編號(hào)A61P35/00GK102908405SQ20121037520
公開日2013年2月6日 申請(qǐng)日期2012年9月29日 優(yōu)先權(quán)日2012年9月29日
發(fā)明者蔡宇, 張榮華 申請(qǐng)人:暨南大學(xué)