專利名稱：一種鮮土貝母提取物及其制備方法
技術領域：
本發(fā)明涉及一種中藥提取物及其制備方法，特別涉及ー種鮮土貝母ニ氯甲烷提取物及其制備方法，屬于醫(yī)藥生物技術領域。
背景技術：
土貝母為葫蘆科植物土貝母[Bolbostemma paniculatum(Maxim. )Franquet]的干燥塊莖，是ー種傳統(tǒng)中藥。其又被稱為土貝、大貝母、地苦膽、草貝等。主產于河南、陜西、山東等地。臨床具有清熱解毒、消腫散結之功效。土貝母所含的主要成分有脂肪酸、留醇、三萜皂苷等。分離出來的多種化學成分經實驗表明具有抗腫瘤作用。據(jù)文獻調查，所進行的理化實驗材料多為土貝母干品，而用土貝母鮮品進行研究者甚少。

發(fā)明內容
本發(fā)明目的在于提供一種鮮土貝母提取物，本發(fā)明另一目的在于提供該提取物的制備方法。本發(fā)明目的是通過如下技術方案實現(xiàn)的本發(fā)明鮮土貝母提取物的制備方法包括如下步驟取土貝母鮮品800 1200重量份，用蒸餾水洗凈，用研缽研碎，過10目篩，置索氏·提取器中，用6 10重量倍的石油醚回流提取至回流提取液近無色，揮去藥渣中的石油醚，用6 10重量倍的ニ氯甲烷提取至提取液近無色，提取液減壓回收ニ氯甲烷至干，在50 70°C狀態(tài)下，真空干燥，得ニ氯甲烷提取物；本發(fā)明鮮土貝母提取物的制備方法可以優(yōu)選為如下步驟取土貝母鮮品1000重量份，用蒸餾水洗凈，用研缽研碎，過10目篩，置索氏提取器中，用8重量倍的石油醚回流提取至回流提取液近無色，揮去藥渣中的石油醚，用8重量倍的ニ氯甲烷提取至提取液近無色，提取液減壓回收ニ氯甲烷至干，在60°C狀態(tài)下，真空干燥，得ニ氯甲烷提取物；本發(fā)明鮮土貝母提取物制備方法還可以優(yōu)選為如下步驟取土貝母鮮品900重量份，用蒸餾水洗浄，用研缽研碎，過10目篩，置索氏提取器中，用9重量倍的石油醚回流提取至回流提取液近無色，揮去藥渣中的石油醚，用9重量倍的ニ氯甲烷提取至提取液近無色，提取液減壓回收ニ氯甲烷至干，在55°C狀態(tài)下，真空干燥，得ニ氯甲烷提取物；本發(fā)明鮮土貝母提取物的制備方法還可以優(yōu)選為如下步驟取土貝母鮮品1100重量份，用蒸餾水洗凈，用研缽研碎，過10目篩，置索氏提取器中，用7重量倍的石油醚回流提取至回流提取液近無色，揮去藥渣中的石油醚，用7重量倍的ニ氯甲烷提取至提取液近無色，提取液減壓回收ニ氯甲烷至干，在65°C狀態(tài)下，真空干燥，得ニ氯甲烷提取物；取本發(fā)明土貝母ニ氯甲烷提取物，加入常規(guī)輔料，按照常規(guī)ェ藝，制成片劑、膠囊
4劑、散劑、軟膠囊劑、滴丸、蜜丸、丸剤、顆粒劑、蜜煉膏劑、緩釋制劑、速釋制劑、控釋制劑、ロ服液體制劑、凍干粉針劑或注射制劑。上述本發(fā)明藥物組合物及其制備方法中的重量份與體積份的關系為g/ml的關系O本發(fā)明首次以鮮土貝母為原料，通過提取富集及柱層析的方法富集特定洗脫組分。該發(fā)明方法提取的有效部位提取物成分純度高，成分相對清晰，富集方法簡單，重復性好。下述實驗例和實施例用于進ー步說明但不限于本發(fā)明。實驗例一 MTT法測定取對數(shù)生長期的腫瘤細胞，用含10%小牛血清的RPMI-1640培養(yǎng)液調配成濃度為7000個/ml，接種于96孔板，每孔加入200 μし細胞貼壁后，分別加入50 μ L 土貝母鮮品ニ氯甲烷提取物(實施例I制備)藥物溶液，試藥按濃度遞增原則各設5個不同的濃度，終濃度分別為O. l、l、10，20，40g/ml，每種藥的每種濃度均設10個平行孔，空白陰性對照組為等容積的RPMI-1640培養(yǎng)基。在37°C、5% CO2條件下培養(yǎng)48h。每孔加入20 μ L濃度為5mg/ml的MTT溶液，振蕩混勻后繼續(xù)培養(yǎng)4h。棄去上清液，每孔加入150 μ L DMSO溶液，輕輕振蕩10分鐘使MTT甲瓚沉淀溶解，用酶標儀(測定波長為570nm)測定其OD值，計算抑制率，求IC50、IC90。按下列公式計算藥物對腫瘤細胞増殖的抑制率。抑制率(％ ) = [1_(藥物組OD值-空白組OD值V(對照組-空白組OD值)]*100%為了證明實驗結果的客觀性及可重復性，我們進行了三次重復實驗，結果見表ー
和表ニ。 表ー該藥物對MCF-7細胞體外抑制作用結果
權利要求
1.一種鮮土貝母提取物，其特征在于該提取物由如下方法制成 取土貝母鮮品800 1200重量份，用蒸餾水洗凈，用研缽研碎，過10目篩，置索氏提取器中，用6 10倍重量的石油醚回流提取至回流提取液近無色，揮去藥渣中的石油醚，用6 10倍重量的ニ氯甲烷提取至提取液近無色，提取液減壓回收ニ氯甲烷至干，在50 70°C狀態(tài)下，真空干燥，即得土貝母提取物。
2.如權利要求I所述的土貝母提取物，其特征在于該提取物由如下方法制成 取土貝母鮮品1000重量份，用蒸餾水洗凈，用研缽研碎，過10目篩，置索氏提取器中，用8倍重量的石油醚回流提取至回流提取液近無色，揮去藥渣中的石油醚，用8倍重量的ニ氯甲烷提取至提取液近無色，提取液減壓回收ニ氯甲烷至干，在60°C狀態(tài)下，真空干燥，備用，即得土貝母提取物。
3.如權利要求I所述的土貝母提取物，其特征在于該提取物由如下方法制成 取土貝母鮮品900重量份，用蒸餾水洗凈，用研缽研碎，過10目篩，置索氏提取器中，用9倍重量的石油醚回流提取至回流提取液近無色，揮去藥渣中的石油醚，用9倍重量的ニ氯甲烷提取至提取液近無色，提取液減壓回收ニ氯甲烷至干，在55°C狀態(tài)下，真空干燥，即得土貝母提取物。
4.如權利要求I所述的土貝母提取物，其特征在于該提取物由如下方法制成 取土貝母鮮品1100重量份，用蒸餾水洗凈，用研缽研碎，過10目篩，置索氏提取器中，用7倍重量的石油醚回流提取至回流提取液近無色，揮去藥渣中的石油醚，用7倍重量的ニ氯甲烷提取至提取液近無色，提取液減壓回收ニ氯甲烷至干，在65°C狀態(tài)下，真空干燥，即得土貝母提取物。
5.如權利要求1-4任一所述的土貝母提取物，其特征在于取本發(fā)明土貝母提取物，加入常規(guī)輔料，按照常規(guī)エ藝，制成片劑、膠囊劑、散劑、軟膠囊劑、滴丸、蜜丸、丸劑、顆粒劑、蜜煉膏劑、緩釋制劑、速釋制劑、控釋制劑、ロ服液體制劑、凍干粉針劑或注射制劑。
6.一種鮮土貝母提取物的制備方法，其特征在于該方法為 取土貝母鮮品800 1200重量份，用蒸餾水洗凈，用研缽研碎，過10目篩，置索氏提取器中，用6 10倍重量的石油醚回流提取至回流提取液近無色，揮去藥渣中的石油醚，用6 10倍重量的ニ氯甲烷提取至提取液近無色，提取液減壓回收ニ氯甲烷至干，在50 70°C狀態(tài)下，真空干燥，即得土貝母提取物。
7.如權利要求6所述的土貝母提取物的制備方法，其特征在于該方法為 取土貝母鮮品1000重量份，用蒸餾水洗凈，用研缽研碎，過10目篩，置索氏提取器中，用8倍重量的石油醚回流提取至回流提取液近無色，揮去藥渣中的石油醚，用8倍重量的ニ氯甲烷提取至提取液近無色，提取液減壓回收ニ氯甲烷至干，在60°C狀態(tài)下，真空干燥，即得土貝母提取物。
8.如權利要求6所述的土貝母提取物的制備方法，其特征在于該方法為 取土貝母鮮品900重量份，用蒸餾水洗凈，用研缽研碎，過10目篩，置索氏提取器中，用9倍重量的石油醚回流提取至回流提取液近無色，揮去藥渣中的石油醚，用9倍重量的ニ氯甲烷提取至提取液近無色，提取液減壓回收ニ氯甲烷至干，在55°C狀態(tài)下，真空干燥，即得土貝母提取物。
9.如權利要求6所述的土貝母提取物的制備方法，其特征在于該方法為取土貝母鮮品1100重量份，用蒸餾水洗凈，用研缽研碎，過10目篩，置索氏提取器中，用7倍重量的石油醚回流提取至回流提取液近無色，揮去藥渣中的石油醚，用7倍重量的ニ氯甲烷提取至提取液近無色，提取液減壓回收ニ氯甲烷至干，在65°C狀態(tài)下，真空干燥，即得土貝母提取物。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種土貝母提取物的制備方法。該提取物由以下制備方法制成取土貝母鮮品，經石油醚回流提取，揮去藥渣中的石油醚，再經二氯甲烷提取，回收二氯甲烷至干，真空干燥，備用即得。本發(fā)明首次以鮮土貝母為原料，通過常規(guī)提取富集，并采用柱層析的方法富集特定洗脫組分。該發(fā)明方法提取的有效部位提取物成分純度高，成分相對清晰，富集方法簡單，重復性好。
文檔編號A61K36/42GK102908381SQ20111022199
公開日2013年2月6日 申請日期2011年8月4日 優(yōu)先權日2011年8月4日
發(fā)明者傅延齡 申請人:北京中醫(yī)藥大學